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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-09 17:21:58瀏覽次數(shù):188次
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人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
37707 月桂酸標(biāo)準(zhǔn)品 Lauric Acid 500mg 143-07-7
37708 月桂酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 Lauroyl Polyoxylglycerides 500mg
37709 *標(biāo)準(zhǔn)品 Leflunomide 200mg 75706-12-6
37710 *標(biāo)準(zhǔn)品 Letrozole 200mg 112809-51-5
37711 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 112809-52-6
37712 L-*標(biāo)準(zhǔn)品 L-Leucine 200mg 61-90-5
37713 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 455-14-1
37714 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 108605-62-5
37715 *相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 61643-23-0
37716 亞*鈣標(biāo)準(zhǔn)品 Leucovorin Calcium 500mg 1492-18-8
37717 *標(biāo)準(zhǔn)品 200mg 74381-53-6
37718 左*鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Levalbuterol Hydrochloride 200mg 50293-90-8
37719 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
37720 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 18910-68-4
37721 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 18910-70-8
37722 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
37723 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 754926-25-5
37724 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 174607-68-2
37725 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)G標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 182676-90-0
37726 *相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品 5mg 870076-72-5
37727 鹽酸咪唑標(biāo)準(zhǔn)品 Levamisole Hydrochloride 125mg 16595-80-5
37728 *標(biāo)準(zhǔn)品 Levetiracetam 200mg 102767-28-2
37729 *外消旋混合物標(biāo)準(zhǔn)品 Levetiracetam Racemic Mixture 15mg 33996-58-6
37730 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 102767-31-7
37731 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 7682-20-4
37732 鹽酸布諾洛爾標(biāo)準(zhǔn)品 Levobunolol Hydrochloride 200mg 27912-14-7
37733 *標(biāo)準(zhǔn)品 Levocabastine Hydrochloride 50mg 79547-78-7
37734 左卡巴斯汀相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 80139-91-9
37735 *標(biāo)準(zhǔn)品 Levocarnitine 400mg 541-15-1
37736 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 100mg 6538-82-5
37737 多巴標(biāo)準(zhǔn)品 Levodopa 200mg 59-92-7
37738 多巴相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 27244-64-0
37739 左*標(biāo)準(zhǔn)品 Levofloxacin 350mg 138199-71-0
37740 左*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 117707-40-1
37741 左*雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 177472-30-9
37742 左美諾醇標(biāo)準(zhǔn)品 Levomenol 100mg 23089-26-1
37743 異腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品 Levonordefrin 200mg 829-74-3
37744甲*標(biāo)準(zhǔn)品 Levonorgestrel 200mg 797-63-7
37745 萘磺酸左丙氧芬標(biāo)準(zhǔn)品 Levopropoxyphene Napsylate 300mg 55557-30-7
37746 酒石酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Levorphanol Tartrate CII 500mg 5985-38-6
37747 甲狀腺素標(biāo)準(zhǔn)品 Levothyroxine 500mg 51-48-9
37748 甲狀腺素標(biāo)準(zhǔn)品(峰值定性用) 15mg
37749 *標(biāo)準(zhǔn)品 Lidocaine 250mg 137-58-6
37750 鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Lincomycin Hydrochloride 200mg 7179-49-9
37751 林丹標(biāo)準(zhǔn)品 Lindane 人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒200mg 58-89-9
37752 亞油酯酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 Linoleoyl Polyoxylglycerides 100mg
37753 碘噻羅寧標(biāo)準(zhǔn)品 Liothyronine 250mg 6893/2/3
37754 α-*標(biāo)準(zhǔn)品 Alpha Lipoic Acid 500mg 1077-28-7
37755 *標(biāo)準(zhǔn)品 Lisinopril 300mg 83915-83-7
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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