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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
38009 諾龍標準品 Nandrolone CIII 50mg 434-22-0
38010 癸酸諾龍標準品 Nandrolone Decanoate CIII 250mg 360-70-3
38011 *標準品 Nandrolone Phenpropionate CIII 250mg 62-90-8
38012 *標準品 Naphazoline Hydrochloride 200mg 550-99-2
38013 萘標準品 Naphthalene 200mg 91-20-3
38014 *標準品 Naproxen 200mg 22204-53-1
38015 *鈉標準品 Naproxen Sodium 200mg 26159-34-2
38016 甲基鹽霉素標準品 Narasin 125mg 55134-13-9
38017 鹽酸那拉曲坦標準品 Naratriptan Hydrochloride 125mg 143388-64-1
38018 納他霉素標準品 Natamycin 200mg 7681-93-8
38019 *標準品 Nateglinide 200mg 105816-04-4
38020 *相關物質A標準品 Nateglinide Related Compound A 10mg 7077/5/6
38021 *相關物質B標準品 10mg 105816-05-5
38022 *相關物質C標準品 5mg 105816-06-6
38023 近紅外系統適用性參考標準標準品 Near IR System Suitability ea
38024 萘法唑酮鹽酸鹽標準品 Nefazodone Hydrochloride 200mg 82752-99-6
38025 萘法唑酮相關物質A標準品 Nefazodone Related Compound A 25mg 57059-62-8
38026 萘法唑酮相關物質B標準品 Nefazodone Related Compound B 25mg
38027 甲磺酸奈非那韋標準品 200mg
38028 新橙皮甙二氫查爾酮標準品 ea
38029 溴化新斯的明標準品 Neostigmine Bromide 200mg 114-80-7
38030 紐甜標準品 Neotame 200mg 165450-17-9
38031 紐甜相關物質A標準品 Neotame Related Compound A 15mg
38032 無水*標準品 Nevirapine Anhydrous 100mg 129618-40-2
38033 半水*標準品 Nevirapine Hemihydrate 100mg 129618-40-2
38034 *相關物質A標準品 15mg 133627-17-5
38035 *相關物質B標準品 15mg 287980-84-1
38036 *標準品 Niacinamide (Vitamin B3) 500mg 98-92-0
38037 二水合重酒石酸尼古丁標準品 Nicotine Bitartrate Dihydrate 500mg 6019/6/3
38038 *標準品 Nifedipine 125mg 21829-25-4
38039 *硝苯吡啶同系物標準品 25mg 67035-22-7
38040 *亞硝基苯吡啶同系物標準品 25mg 50428-14-3
38041 *標準品 Nimodipine 125mg 66085-59-4
38042 *相關物質B標準品 50mg 70172-96-2
38043 *相關物質A標準品 50mg 85677-93-6
38044 氨基三乙酸標準品 Nitrilotriacetic Acid 50mg 139-13-9
38045 硝唑尼特標準品 Nitazoxanide 200mg 55981-09-4
38046 硝唑尼特相關物質A標準品 25mg 121-66-4
38047 呋喃妥英標準品 Nitrofurantoin 500mg 67-20-9
38048 *標準品 Nitrofurazone 200mg 59-87-0
38049 5-硝基糠醛二乙酸酯標準品 Nitrofurfural Diacetate 100mg 92-55-7
38050 *相關物質A標準品 500mg 112537-96-9
38051 尼扎替定標準品 Nizatidine 200mg 76963-41-2
38052 *10標準品 Nonoxynol 10 200mg 27177-08-8
38053 *標準品 Nordazepam CIV 50mg 1088-11-5
38054 重酒石酸*標準品 Norepinephrine Bitartrate 125mg 69815-49-2
38055 *標準品 人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒Norethindrone 200mg 68-22-4
38056 *醋酸酯標準品 Norethindrone Acetate 100mg 51-98-9
38057 氟諾沙星標準品 Norfloxacin 200mg 70458-96-7
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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