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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-10 01:17:29瀏覽次數(shù):321次
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人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
38259 鹽酸毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品 Pilocarpine Hydrochloride 200mg 54-71-7
38260 哌咪清標(biāo)準(zhǔn)品 Pimozide 200mg 2062-78-4
38261 心得樂標(biāo)準(zhǔn)品 Pindolol 200mg 13523-86-9
38262 鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Pioglitazone Hydrochloride 50mg 112529-15-4
38263 哌西他嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Piperacetazine 250mg 3819-00-9
38264 *標(biāo)準(zhǔn)品 Piperacillin 500mg 66258-76-2
38265 哌嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Piperazine 200mg 110-85-0
38266 哌嗪己二酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Piperazine Adipate 200mg 142-88-1
38267 枸椽酸哌嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Piperazine Citrate 200mg 144-29-6
38268 哌嗪二鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Piperazine Dihydrochloride 200mg 142-64-3
38269 *標(biāo)準(zhǔn)品 Piperazine Phosphate 200mg 14538-56-8
38270 鹽酸吡哌酯標(biāo)準(zhǔn)品 Piperidolate Hydrochloride 200mg 129-77-1
38271 *乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 Pirbuterol Acetate (AS) 200mg 65652-44-0
38272 吡羅克酮乙醇銨標(biāo)準(zhǔn)品 Piroctone Olamine 200mg 68890-66-4
38273 吡羅克酮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Piroctone Related Compound A 15mg
38274 吡羅克酮相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 Piroctone Related Compound B 25mg 50650-75-4
38275 *標(biāo)準(zhǔn)品 Piroxicam 200mg 36322-90-4
38276 普卡霉素標(biāo)準(zhǔn)品 Plicamycin 50mg 18378-89-7
38277 聚克利樹脂標(biāo)準(zhǔn)品 Polacrilex Resin 100mg
38278 波拉克林鉀標(biāo)準(zhǔn)品 Polacrilin Potassium 200mg 65405-55-2
38279 泊洛沙姆標(biāo)準(zhǔn)品 Poloxalene 500mg 9003/11/6
38280 泊洛沙姆液標(biāo)準(zhǔn)品 Poloxamer Liquid 1ml 9003/11/6
38281 泊洛沙姆固體標(biāo)準(zhǔn)品 Poloxamer Solid 1g 9003/11/6
38282 聚葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品 Polydextrose 200mg 68424-04-4
38283 聚二甲基硅氧烷標(biāo)準(zhǔn)品 Polydimethylsiloxane 500mg 9016-00-6
38284 聚乙二醇200標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 200 1g 25322-68-3
38285 聚乙二醇300標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 300 1g 25322-68-3
38286 聚乙二醇400標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 400 1g 25322-68-3
38287 聚乙二醇600標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 600 1g 25322-68-3
38288 聚乙二醇1000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 1000 1g 25322-68-3
38289 聚乙二醇1500標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 1500 1g 25322-68-3
38290 聚乙二醇3000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 3000 1g 25322-68-3
38291 聚乙二醇3350標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 3350 1g 25322-68-3
38292 聚乙二醇4000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 4000 1g 25322-68-3
38293 聚乙二醇6000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 6000 1g 25322-68-3
38294 聚乙二醇8000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 8000 1g 25322-68-3
38295 聚乙二醇10000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 10000 1g 25322-68-3
38296 聚乙二醇12000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 12000 1g 25322-68-3
38297 聚乙二醇20000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 20000 1g 25322-68-3
38298 聚乙二醇35000標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Glycol 35000 1g 25322-68-3
38299 高密度聚乙烯標(biāo)準(zhǔn)品 High Density Polyethylene 3 strips 9002-88-4
38300 低密度聚乙烯標(biāo)準(zhǔn)品 Low-Density Polyethylene 3 strips 9002-88-4
38301 聚氧化乙烯標(biāo)準(zhǔn)品 Polyethylene Oxide 100mg 25322-68-3
38302 聚對苯二甲酸乙二酯標(biāo)準(zhǔn)品 3 strips 25038-59-9
38303 聚對苯二甲酸乙二酯G標(biāo)準(zhǔn)品 3 strips 25640-14-6
38304 聚甘油-3 二異硬脂酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 Polyglyceryl 3 Diisostearate 1ml 63705-03-3
38305 聚異丁烯標(biāo)準(zhǔn)品 人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒Polyisobutylene 1g 9003-27-4
38306 聚乙二醇15羥基硬脂酸標(biāo)準(zhǔn)品 Polyoxyl 15 Hydroxystearate 500mg 70142-34-6
38307 聚氧乙烯硬脂酸酯2標(biāo)準(zhǔn)品 Polyoxyl 2 Stearyl Ether (AS) 1g 9005-00-9
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人抗精子抗體(AsAb)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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