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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
38859 丙戊酸相關物質B標準品 50mg 62391-99-5
38860 丙戊酸相關物質A標準品 0.25ml 99-67-2
38861 戊柔比星標準品 Valrubicin 100mg 56124-62-0
38862 戊柔比星分離度用混合物標準品 Valrubicin Resolution Mixture 25mg
38863 *標準品 Valsartan 350mg 862-53-4
38864 *相關化合物 A標準品 10mg 137862-87-4
38865 *相關物質B標準品 10mg
38866 *相關物質C標準品 10mg 137863-20-8
38867 鹽酸*標準品 4vials 04-93-9
38868 *B標準品(含單二氯*) 350mg
38869 香蘭素標準品 Vanillin 200mg 121-33-5
38870 香蘭素熔點標準物標準品 1g 121-33-5
38871 鴨嘴花堿 ea
38872 加壓素標準品 1.78mg 113-79-1
38873 賴氨加壓素標準品 Lypressin 2.2mg 50-57-7
38874 *標準品 Vecuronium Bromide 50mg 50700-72-6
38875 *相關物質A標準品 25mg
38876 *相關物質B標準品 15mg 50587-95-6
38877 *相關物質C標準品 15mg 73319-30-9
38878 *標準品 Verapamil Hydrochloride 200mg 152-11-4
38879 *相關物質F標準品 15mg
38880 鹽酸*標準品 Venlaine Hydrochloride 100mg 99300-78-4
38881 萬拉法新相關物質A標準品 10mg 93413-90-2
38882 維拉帕米相關物質A標準品 50mg 67775-97-7
38883 維拉帕米相關物質B標準品 50mg 1794-55-4
38884 維拉帕米相關物質D標準品 Verapamil Related Compound D 50mg 190850-50-1
38885 維拉帕米相關物質E標準品 Verapamil Related Compound E 50mg 120-14-9
38886 維拉帕米相關物質F標準品 Verapamil Related Compound F 150mg 1993/3/8
38887 維替泊芬標準品 Verteporfin 200mg 129497-78-5
38888 維替泊芬相關物質A標準品 Verteporfin Related Compound A 50mg
38889 阿糖腺苷標準品 Vidarabine 200mg 24356-66-9
38890 *標準品 Vinorelbine Tartrate 200mg 125317-39-7
38891 長春瑞賓相關物質A標準品 25mg
38892 *標準品 Vinpocetine 100mg 42971-09-5
38893 *相關物質A標準品 30mg 63-56-2
38894 *相關物質B標準品 30mg 4880-92-6
38895 *相關物質D標準品 30mg 57327-92-1
38896 *標準品 10ampules
38897 含量測定系統適用性用*標準品 1.5g
38898 牡荊素標準品 Vitexin 25mg 3681-93-4
38899 *標準品 Voriconazole 100mg 137234-62-9
38900 *雜質A 10mg 182230-43-9
38901 *相關物質B 10mg 137234-63-0
38902 *相關物質C 10mg 86404-63-9
38903 *相關物質D 人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒10mg
38904 *相關物質F 50mg 5872/8/2
38905 *標準品 Warfarin 200mg 81-81-2
38906 *相關物質A標準品 50mg 37209-23-7
38907 睡茄交酯 A標準品 Withanolide A 15mg 32911-62-9
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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