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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
39089 百里酚標準品 Thymol 500mg 89-83-8
39090 *相關物質D標準品 50mg 89797-00-2
39091 *酸標準品 Tazobactam 200mg 89786-04-9
39092 異抗壞血酸標準品 Erythorbic Acid 50mg 89-65-6
39093 *標準品 Mesalamine 200mg 89-57-6
39094 去甲替林鹽酸鹽標準品 Nortriptyline Hydrochloride 200mg 894-71-3
39095 5-苯基海因標準品 5-Phenylhydantoin 100mg 89-24-7
39096 *標準品 Fosinopril Sodium 200mg 88889-14-9
39097 *相關物質B標準品 20mg 887196-25-0
39098 苯海拉明檸檬酸鹽標準品 Diphenhydramine Citrate 125mg 88637-37-0
39099 *相關物質A標準品 15mg 88546-55-8
39100 *相關物質B標準品 15mg 88495-63-0
39101 青*標準品 Artesunate 200mg 88495-63-0
39102 2-叔丁基-4-羥基茴香醚標準品 2-tert-Butyl-4-hydroxyanisole 200mg 88-32-4
39103 普羅帕酮相關物質B標準品 Propafenone Related Compound B 50mg 88308-22-9
39104 鄰甲苯磺酰胺標準品 o-Toluenesulfonamide 200mg 88-19-7
39105 辛基三嗪酮標準品 Ethylhexyl Triazone 200mg 88122-99-0
39106 *標準品 Xylitol 1g 87-99-0
39107 肌醇標準品 Inositol 500mg 87-89-8
39108 塔格糖標準品 Tagatose 200mg 87-81-0
39109 碘氟醇標準品 Ioversol 200mg 87771-40-2
39110 酒石酸標準品 Tartaric Acid 1g 87-69-4
39111 齊拉西酮相關物質A標準品 10mg 87691-88-1
39112 群多普利標準品 Trandolapril 125mg 87679-37-6
39113 重酒石酸*標準品 Choline Bitartrate 200mg 87-67-2
39114 *標準品 Ramipril 125mg 87333-19-5
39115 甲基吡咯烷酮標準品 Methylpyrrolidone 2g 872-50-4
39116 二類殘留溶劑-N-甲基吡咯烷酮標準品 1.2ml×3ampules 872-50-4
39117 *標準品 Cefpodoxime Proxetil 350mg 87239-81-4
39118 *標準品 Emedastine Difumarate 100mg 87233-62-3
39119 *相關物質A標準品 10mg 871550-15-1
39120 *相關物質H標準品 5mg 870076-72-5
39121 *相關物質A標準品 25mg 86-98-6
39122 胺碘酮相關物質H標準品 Amiodarone Related Compound H 20mg 869-24-9
39123 酒石酸氫鉀標準品 Potassium Bitartrate (AS) 3g 868-14-4
39124 乳酸鈉標準品 Sodium Lactate 200mg 867-56-1
39125 卡洛芬相關物質A標準品 Carprofen Related Compound A 50mg 86-74-8
39126 伊立替康相關物質B標準品 10mg 86639-52-3
39127 *相關物質C標準品 50mg 865792-18-3
39128 貝那普利相關物質C標準品 50mg 86541-78-8
39129
雙-乙基乙氧*甲氧苯基三嗪相關物質混合物標準品
Bemotrizinol Impurity Mixture 100mg 86541-74-4
39130 *標準品 Benazepril Hydrochloride 125mg 86541-74-4
39131 *相關物質C 10mg 86404-63-9
39132 苯甲地那銨標準品 Denatonium Benzoate 200mg 86398-53-0
39133 環丙羧酸標準品 Fluoroquinolonic Acid 150mg 86393-33-1
39134 鹽酸*標準品 Ciprofloxacin Hydrochloride 400mg 86393-32-0
39135 *標準品人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒 Fluconazole 200mg 86386-73-4
39136 *相關物質A標準品 15mg 86357-09-7
39137 乙苯妥英標準品 Ethotoin 200mg 86-35-1
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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