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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
39241 甲*標準品 Levonorgestrel 200mg 797-63-7
39242 *外消旋混合物標準品 25mg 79617-89-3
39243 *標準品 Sertraline Hydrochloride 100mg 79559-97-0
39244 *標準品 Levocabastine Hydrochloride 50mg 79547-78-7
39245 *標準品 Cefixime 500mg 79350-37-1
39246 *相關物質B標準品 10mg 79350-10-0
39247 乙酸甲酯標準品 Methyl Acetate 1.2ml×3ampules 79-20-9
39248 *相關物質C標準品 25mg 791-28-6
39249 *相關物質A標準品 15mg 79088-29-2
39250 *相關物質B標準品 15mg 79081-87-1
39251 2-丁酮¤標準品 Methyl Ethyl Ketone 1.2ml×3ampules 78-93-3
39252 仲丁醇標準品 2-Butanol 1.2ml×3ampules 78-92-2
39253 2-甲基-1-丙醇標準品 2-Methyl-1-propanol 1.2ml×3ampules 78-83-1
39254 *標準品 Flumazenil 200mg 78755-81-4
39255 *標準品 Terbinafine Hydrochloride 200mg 78628-80-5
39256 *相關物質B標準品 20mg 78454-17-8
39257 卡立普多標準品 Carisoprodol 1g 78-44-4
39258 *五水合物標準品 Ceftazidime Pentahydrate 300mg 78439-06-2
39259 *標準品 Milrinone 500mg 78415-72-2
39260 甲溴菲寧標準品 Mebrofenin 100mg 78266-06-5
39261 *標準品 Potassium Guaiacolsulfonate 500mg 78247-49-1
39262 *標準品 Aztreonam 200mg 78110-38-0
39263 磺胺甲基嘧啶標準品 Sulfamerazine 500mg 7-79-7
39264 奎寧酸標準品 Quinic Acid 200mg 77-95-2
39265 檸檬酸三丁酯標準品 Tributyl Citrate 500mg 77-94-1
39266 檸檬酸三乙酯標準品 Triethyl Citrate 500mg 77-93-0
39267 檸檬酸標準品 Citric Acid 200mg 77-92-9
39268 氯化鎂標準品 Magnesium Chloride (AS) 1g 7791-18-6
39269 乙酰檸檬酸三丁酯標準品 Acetyltributyl Citrate 500mg 77-90-7
39270 乙酰檸檬酸三乙酯標準品 Acetyltriethyl Citrate 500mg 77-89-4
39271 *標準品 Doxazosin Mesylate 200mg 77883-43-3
39272 三羥甲基氨基甲烷標準品 Tromethamine 125mg 77-86-1
39273 磷酸氫二銨標準品 1g 7783-28-0
39274 磷標準品 5g 7778-77-0
39275 乙琥胺標準品 Ethosuximide 500mg 77-67-8
39276 磷酸鎂標準品 Magnesium Phosphate (AS) 2g 7757-87-1
39277 *相關物質A標準品 20mg 77517-29-4
39278 甲琥胺標準品 Methsuximide 500mg 77-41-8
39279 *相關物質E標準品 Lorazepam Related Compound E 25mg 773871-49-1
39280 *標準品 Chlorthalidone 200mg 77-36-1
39281 氟尼縮松標準品 Flunisolide 200mg 77326-96-6
39282 布他比妥標準品 Butalbital CIII 200mg 77-26-9
39283 尼扎替定標準品 Nizatidine 200mg 76963-41-2
39284 *醋酸酯標準品 250mg 7695-91-2
39285 *相關物質A標準品人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒 20mg 76-93-7
39286 溴化甲哌佐酯標準品 Mepenzolate Bromide 200mg 76-90-4
39287 *相關物質B標準品 20mg 7682-20-4
39288 *相關物質C標準品 100mg 76820-34-3
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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