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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
39339 酮咯酸*標準品 Ketorolac Tromethamine 200mg 74103-07-4
39340 氯米芬相關雜質A標準品 100mg 74056-26-1
39341 癸酸*標準品 Haloperidol Decanoate 200mg 74050-97-8
39342 *標準品 Cilostazol 200mg 73963-72-1
39343 *相關物質B標準品 50mg 73963-62-9
39344 *標準品 Trimethoprim 300mg 738-70-5
39345 *相關物質C標準品 50mg 73851-70-4
39346 磺基水楊酸氯甲烯*標準品 Meclocycline Sulfosalicylate 300mg 73816-42-9
39347 潑尼卡酯標準品 Prednicarbate 200mg 73771-04-7
39348 賽拉嗪標準品 Xylazine 200mg 7361-61-7
39349 *標準品 Omeprazole 200mg 73590-58-6
39350 喹乙宗標準品 Quinethazone 1.5g 73-49-4
39351 芐氟噻嗪標準品 Bendroflumethiazide 200mg 73-48-3
39352 鹽酸*標準品 Bupivacaine Hydrochloride 500mg 73360-54-0
39353 *鋰標準品 Mupirocin Lithium 100mg 73346-79-9
39354 碘普羅胺標準品 Iopromide 400mg 73334-07-3
39355 L-異*標準品 L-Isoleucine 200mg 73-32-5
39356 *相關物質C標準品 15mg 73319-30-9
39357 褪黑素標準品 Melatonin 100mg 73-31-4
39358 *鉀標準品 Potassium Sucrose Octasulfate 300mg 73264-44-5
39359 腺嘌呤標準品 Adenine 200mg 73-24-5
39360 L-*標準品 L-Tryptophan 200mg 73-22-3
39361 鹽酸阿可樂定標準品 Apraclonidine Hydrochloride 100mg 73218-79-8
39362 *相關物質A標準品 Zonisamide Related Compound A 20mg 73101-64-1
39363 *相關物質B標準品 25mg 7305-71-7
39364 *標準品 Carvedilol 200mg 72956-09-3
39365 *相關物質C標準品 20mg 72955-94-3
39366 雌二醇相關物質B標準品 10mg 7291-41-0
39367 培高利特亞砜標準品 Pergolide Sulfoxide 50mg 72822-01-6
39368 *相關物質A標準品 75mg 72811-73-5
39369 丹曲林標準品 Dantrolene 200mg 7261-97-4
39370 利福布丁標準品 Rifabutin 50mg 72559-06-9
39371 *鈉標準品 Methicillin Sodium (AS) 500mg 7246-14-2
39372 *標準品 Oxacillin Sodium 200mg 7240-38-2
39373 *相關物質A標準品 50mg 72-40-2
39374 磺胺甲惡唑標準品 Sulfamethoxazole 200mg 723-46-6
39375 *甲醚標準品 Mestranol 200mg 72-33-3
39376 *標準品 Methylene Blue 250mg 7220-79-3
39377 L-*標準品 L-Threonine 200mg 72-19-5
39378 L-*標準品 L-Valine 200mg 72-18-4
39379 *標準品 Prilocaine 200mg 721-50-6
39380 *標準品 Sulfathiazole 350mg 72-14-0
39381 *相關物質B標準品 50mg 72126-78-4
39382 *相關物質A標準品 20mg 7206-76-0
39383 *標準品 人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒Artemether 100mg 71963-77-4
39384 *相關物質A標準品 Artemether Related Compound A 15mg 71939-50-9
39385 異丙碘胺標準品 Isopropamide Iodide 200mg 71-81-8
39386 鹽酸*標準品 Lincomycin Hydrochloride 200mg 7179-49-9
39387 *標準品 Nafcillin Sodium 200mg 7177-50-6
39388 氨芐*三水酸標準品 Ampicillin Trihydrate 200mg 7177-48-2
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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