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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
39489 氫溴酸右*標準品 500mg 6700-34-1
39490 丙酸鈉標準品 Sodium Propionate 200mg 6700-17-0
39491 *標準品 Ipratropium Bromide 100mg 66985-17-9
39492 *相關物質B標準品 15mg 66900-68-3
39493 鹵貝他索丙酸酯標準品 Halobetasol Propionate 200mg 66852-54-8
39494 *相關物質F標準品 25mg 66845-32-7
39495 葡萄糖胺鹽酸鹽標準品 Glucosamine Hydrochloride 200mg 66-84-2
39496 *相關雜質A標準品 25mg 66774-02-5
39497 雙羥香豆素標準品 Dicumarol 200mg 66-76-2
39498 烏拉莫司汀標準品 500mg 66-75-1
39499 *相關物質E標準品 25mg 667465-00-1
39500 阿氯米松雙丙酸酯標準品 Alclometasone Dipropionate 300mg 66734-13-2
39501 羥氨芐*標準品 Cefadroxil 200mg 66592-87-8
39502 佛司可林標準品 Forskolin 40mg 66575-29-9
39503 *標準品 Amantadine Hydrochloride 200mg 665-66-7
39504 非諾洛芬鈉標準品 Fenoprofen Sodium 500mg 66424-46-2
39505 美比達相關物質C標準品 15mg 66375-96-0
39506 鹽酸*標準品 Ranitidine Hydrochloride 200mg 66357-59-3
39507 *相關物質A標準品 10mg 66335-38-4
39508 *標準品 Cefotiam Hydrochloride 325mg 66309-69-1
39509 *標準品 Piperacillin 500mg 66258-76-2
39510 環丙氨嗪標準品 Cyromazine 200mg 66215-27-8
39511 *標準品 Iohexol 200mg 66108-95-0
39512 甲磺酸培高利特標準品 Pergolide Mesylate 200mg 66104-23-2
39513 *標準品 Nimodipine 125mg 66085-59-4
39514 *相關物質D標準品 20mg 66067-44-5
39515 *標準品 Tioconazole 200mg 65899-73-2
39516 苯甲酸標準品 Benzoic Acid 300mg 65-85-0
39517 L-賴氨酸鹽酸鹽標準品 L-Lysine Hydrochloride 200mg 657-27-2
39518 *相關物質C標準品 100mg 65-71-4
39519 *乙酸酯標準品 Pirbuterol Acetate (AS) 200mg 65652-44-0
39520 *標準品 Aminosalicylic Acid 125mg 65-49-6
39521 *標準品 Naftifine Hydrochloride 200mg 65473-14-5
39522
4-氨基-6-(三氟甲基)苯-1,3-二磺酰胺標準品
30mg 654-62-6
39523 2-羥基芐胺標準品 Salicylamide 200mg 65-45-2
39524 波拉克林鉀標準品 Polacrilin Potassium 200mg 65405-55-2
39525 *相關物質A標準品 100mg 6538-82-5
39526 *標準品 Scopolamine Hydrobromide 250mg 6533-68-2
39527 *標準品 Norgestrel 125mg 6533-00-2
39528 加拉碘銨標準品 Gallamine Triethiodide 200mg 65-29-2
39529 *標準品 Phentolamine Mesylate 200mg 65-28-1
39530 *標準品 Ketoconazole 200mg 65277-42-1
39531 異*75%溶液標準品 Isosorbide (75% solution) 1g 652-67-5
39532 鹽酸育亨賓標準品 Yohimbine Hydrochloride 200mg 65-19-0
39533 17- 雌二醇標準品 17alpha-Dihydroequilin 50mg 651-55-8
39534 秋水仙素標準品人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒 Colchicine 350mg 64-86-8
39535 *二硫化物標準品 Captopril Disulfide 100mg 64806-05-9
39536 *標準品 Tolbutamide 200mg 64-77-7
39537 *標準品 Tetracycline Hydrochloride 200mg 64-75-5
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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