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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
40339 阿斯巴甜標準品 Aspartame 200mg 22839-47-0
40340
5-氨基-3-羧基-2,4,6-三碘-N-甲基苯甲酰胺標準品
50mg 2280-89-9
40341 丙二醇二月桂酸酯標準品 Propylene Glycol Dilaurate 500mg 22788-19-8
40342 碘他拉酸標準品 Iothalamic Acid 200mg 2276-90-6
40343 莰烯*標準品 Cyclothiazide (AS) 200mg 2259-96-3
40344 凱迪恩標準品 KDN 100mg 22594-61-2
40345 *相關物質A標準品 Baclofen Related Compound A 50mg 22518-27-0
40346 *標準品 Diflunisal 200mg 22494-42-4
40347 *相關物質B標準品 25mg 22407-20-1
40348 戊酸*相關物質A標準品 50mg 2240-28-0
40349 莫能菌素鈉鹽標準品 Monensin Sodium 200mg 22373-78-0
40350 美加明相關物質A標準品 10mg 22321-23-9
40351 苯甲酸*標準品 Betamethasone Benzoate 200mg 22298-29-9
40352 葡萄籽低聚原花青素標準品 500mg 222838-60-0
40353 甲磺酸溴隱亭標準品 Bromocriptine Mesylate 150mg 22260-51-1
40354 *標準品 Mazindol CIV 350mg 22232-71-9
40355 *標準品 Naproxen 200mg 22204-53-1
40356 *標準品 Pyran Pamoate 500mg 22204-24-6
40357 *銀標準品 Silver Sulfadiazine 200mg 22199-08-2
40358 鹽酸*標準品 Spectinomycin Hydrochloride 200mg 22189-32-8
40359 薄荷醇標準品 Menthol 250mg 2216-51-5
40360 *相關物質A標準品 Carmustine Related Compound A 10mg 2214-72-4
40361 羅匹尼羅相關物質B標準品 50mg 221264-21-7
40362 *相關物質B標準品 25mg 221176-49-4
40363 *標準品 Ketoprofen 200mg 22071-15-4
40364 磷酸丙吡胺標準品 Disopyramide Phosphate 200mg 22059-60-5
40365 釓特醇相關物質C標準品 50mg 220182-19-4
40366 *相關物質A標準品 25mg 219921-94-5
40367 R-西酞普蘭草酸鹽標準品 10mg 219861-53-7
40368 草酸*對照品標準品 Escitalopram Oxalate 200mg 219861-08-2
40369 鹽酸羥嗪標準品 Hydroxyzine Hydrochloride 500mg 2192-20-3
40370 芝麻油相關物質A標準品 6mg×3vials 2190-21-8
40371 鹽酸克倫特羅標準品 Clenbuterol Hydrochloride 100mg 21898-19-1
40372 *標準品 Nifedipine 125mg 21829-25-4
40373 *相關物質C標準品 25mg 217636-48-1
40374 埃索美拉唑鎂標準品 Esomeprazole Magnesium 10mg 217087-09-7
40375 甲酚曲唑三硅氧烷相關物質A標準品 25mg 2170-37-8
40376 *膠體標準品 Dried Aluminum Hydroxide Gel 200mg 21645-51-2
40377 S-烯丙基-L-半*標準品 S-Allyl-L-Cysteine 25mg 21593-77-1
40378 貝那普利相關物質A標準品 15mg 215447-89-5
40379 戊酸*標準品 Betamethasone Valerate 200mg 2152-44-5
40380 鹽酸*有關物質A對照品標準品 25mg 21436-98-6
40381 *標準品 Oxaprozin 200mg 21256-18-8
40382 對二甲氨基苯甲酸異辛酯標準品 Padimate O 300mg 21245-02-3
40383 優降糖相關物質B標準品 25mg 21165-77-5
40384 依法韋侖相關物質A標準品人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒 20mg 209414-27-7
40385 二硫*標準品 Penicillamine Disulfide 100mg 20902-45-8
40386 *相關物質A標準品 25mg 20880-92-6
40387 二異丙酚標準品 Propofol 200mg 2078-54-8
40388 哌咪清標準品 Pimozide 200mg 2062-78-4
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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