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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
40539 膦甲酸相關物質D標準品 Foscarnet Related Compound D 0.27ml 1474-78-8
40540 *標準品 Diphenhydramine Hydrochloride 200mg 147-24-0
40541 2-脫氧-2-氟-D-葡萄糖相關物質B標準品 10mg 14685-79-1
40542 鹽酸氟*標準品 Fluphenazine Hydrochloride 125mg 146-56-5
40543 *標準品 Selegiline Hydrochloride 200mg 14611-52-0
40544 曲氟胸苷相關物質A標準品 20mg 14599-46-3
40545 鹽酸噻加賓標準品 Tiagabine Hydrochloride 300mg 145821-59-6
40546 阿米洛利相關物質A標準品 30mg 1458-01-1
40547 醋酸戈舍瑞林標準品 Goserelin Acetate 100mg 145781-92-6
40548 多奈哌齊A標準品 25mg 145546-80-1
40549 牛磺膽酸堿標準品 Bile Salts 10mg 145-42-6
40550 *標準品 Piperazine Phosphate 200mg 14538-56-8
40551 恩他卡朋相關物質A標準品 Entacapone Related Compound A 25mg 145195-63-7
40552 *標準品 Sulfapyridine 200mg 144-83-2
40553 *熔點標準物標準品 1g 144-83-2
40554 磺胺甲噻二唑標準品 Sulfamethizole 200mg 144-82-1
40555 *標準品 Sulfacetamide 300mg 144-80-9
40556 *相關雜質B標準品 20mg 144750-52-7
40557 *相關雜質A標準品 20mg 144750-42-5
40558 *標準品 misartan 150mg 144701-48-4
40559 *標準品 Sodium Bicarbonate (AS) 3g 144-55-8
40560 枸椽酸哌嗪標準品 Piperazine Citrate 200mg 144-29-6
40561 酚磺酞標準品 Phenolsulfonphthalein 100mg 143-74-8
40562 *標準品 Emtricitabine 200mg 143491-57-0
40563 鹽酸那拉曲坦標準品 Naratriptan Hydrochloride 125mg 143388-64-1
40564 月桂酸標準品 Lauric Acid 500mg 143-07-7
40565 棕櫚酸異丙酯標準品 Isopropyl Palmitate 500mg 142-91-6
40566 哌嗪己二酸鹽標準品 Piperazine Adipate 200mg 142-88-1
40567 庚烷標準品 Heptane 1.2ml×3ampules 142-82-5
40568 哌嗪二鹽酸鹽標準品 Piperazine Dihydrochloride 200mg 142-64-3
40569 帕苯達唑標準品 Parbendazole 200mg 14255-87-9
40570 *一鈉標準品 Monosodium Glutamate (AS) 1g 142-47-2
40571 馬來酸二乙基己酯標準品 Bis(2-ethylhexyl)maleate 2ml 142-16-5
40572 △-4,6-膽甾二烯醇標準品 Delta-4,6-cholestadienol 30mg 14214-69-8
40573 乙酸乙酯標準品 Ethyl Acetate 1.2ml×3ampules 141-78-6
40574 鹽酸替來他明標準品 Tiletamine Hydrochloride 200mg 14176-50-2
40575 前列腺素A1標準品 Prostaglandin A1 25mg 14152-28-4
40576 乙醇胺標準品 Monoethanolamine 1ml 141-43-5
40577 二異丙酚相關物質C標準品 50mg 141214-18-8
40578 格拉司瓊相關物質C標準品 15mg 141136-01-8
40579 錳福地吡三鈉標準品 Mangafodipir Trisodium 200mg 140678-14-4
40580 依西酸噴他脒標準品 Pentamidine Isethionate 200mg 140-64-7
40581 短*標準品 Gramicidin 200mg 1405-97-6
40582 *鋅標準品 Bacitracin Zinc 200mg 1405-89-6
40583 *標準品人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒 1g 1405-87-4
40584 甘草酸標準品 Glycyrrhizic Acid 25mg 1405-86-3
40585 酒石酸泰洛星標準品 Tylosin Tartrate 100mg 1405-54-5
40586 *標準品 Olopatadine Hydrochloride 150mg 140462-76-6
40587 *標準品 Candicidin 200mg 1403-17-4
40588 阿莫沙平標準品 Amoxapine 200mg 14028-44-5
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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