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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-28 23:34:11瀏覽次數(shù):204次
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人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
41595 柚皮素 Naringenin 20mg/支 480-41-1
41596 * Bergenin 20mg/支 477-90-7
41597 *
41598 小檗堿 Berberine 黃連素堿 20mg/支 2086-83-1
41599 黃連堿 Coptisine 20mg/支 3486-66-6
41600 鹽酸黃連堿 Coptisine chloride 氯化黃連堿 20mg/支 6020-18-4
41601 胡黃連苷I Picroside I 胡黃連苦苷I 20mg/支 27409-30-9
41602 胡黃連苷II Picroside II 胡黃連苦苷II 20mg/支 39012-20-9
41603 胡黃連苷III Picroside III 胡黃連苦苷III 10mg/支 64461-95-6
41604 表沒食子兒茶素沒食子酸酯 (?)-Epigallocatechin gallate EGCG 20mg/支 989-51-5
41605 表兒茶素沒食子酸酯 (?)-Epicatechin gallate ECG 20mg/支 1257-08-5
41606 表沒食子兒茶素 (?)-Epigallocatechin EGC 20mg/支 970-74-1
41607 沒食子兒茶素沒食子酸酯 (?)-Gallocatechin gallate GCG 20mg/支 4233-96-9
41608 銀杏內(nèi)酯A Ginkgolide A 20mg/支 15291-75-5
41609 銀杏內(nèi)酯B Ginkgolide B 20mg/支 15291-77-7
41610 銀杏內(nèi)酯C Ginkgolide C 20mg/支 15291-76-6
41611 白果內(nèi)酯 (?)-Bilobalide 銀杏內(nèi)酯BB 20mg/支 33570-04-6
41612 斑蝥素 Cantharidin 20mg/支 56-25-7
41613 * Norcantharidin 20mg/支 1294030
41614 龍膽苦苷 Gentiopicroside 20mg/支 20831-76-9
41615 膽酸 Cholic acid 20mg/支 81-25-4
41616 芝麻素 Sesamin 20mg/支 607-80-7
41617 芝麻林素 Sesamolin 20mg/支 526-07-8
41618 * Paclitaxel 20mg/支 33069-62-4
41619 大麥芽堿 Hordenine 大麥堿 20mg/支 539-15-1
41620 厚樸酚 Magnolol 20mg/支 528-43-8
41621 和厚樸酚 Honokiol 20mg/支 35354-74-6
41622 番瀉苷A Sennoside A 蕃瀉苷A 20mg/支 81-27-6
41623 番瀉苷B Sennoside B 蕃瀉苷B 20mg/支 128-57-4
41624 番瀉苷C Sennoside C 蕃瀉苷C 20mg/支 37271-16-2
41625 番瀉苷D Sennoside D 蕃瀉苷D 20mg/支 37271-17-3
41626 紫草素 Shikonin 紫草醌;紫草寧;歐根草;紫根色素 20mg/支 517-89-5
41627 川楝素 Toosendanin 20mg/支 58812-37-6
41628 川芎嗪 Tetramethylpyrazine 20mg/支 1124-11-4
41629 * Ligustrazine Hydrochloride 20mg/支 76494-51-4
41630 異鼠李素 Isorhamnetin 20mg/支 480-19-3
41631 D-(+)-木糖 D-(+)-Xylose 20mg/支 58-86-6
41632 積雪草苷 Asiaticoside 亞細(xì)亞皂苷 20mg/支 16830-15-2
41633 羥基積雪草苷 Madecassoside 20mg/支 34540-22-2
41634 積雪草酸 Asiatic acid 20mg/支 464-92-6
41635 羥基積雪草酸 Madecassic acid 20mg/支 18449-41-7
41636 β-谷甾醇 β-Sitosterol 20mg/支 83-46-5
41637 * Capsaicin 辣椒素(天然純化分離) 20mg/支 404-86-4
41638 二氫* Dihydrocapsaicin 二氫辣椒素 20mg/支 19408-84-5
41639 胡椒堿 Piperine 胡椒酰胺 20mg/支 94-62-2
41640 鳶尾黃素 Tectorigenin 20mg/支 548-77-6
41641 鳶尾苷 Tectoridin 射干苷 20mg/支 611-40-5
41642 五味子甲素 Schizandrin A 20mg/支 61281-38-7
41643 五味子乙素 Schizandrin B 20mg/支 61281-37-6
41644 五味子醇甲 Schisandrol A 20mg/支 7432-28-2
41645 五味子酯乙 Schisantherin B 20mg/支 58546-55-7
41646 五味子酯甲 Schisantherin A 20mg/支 58546-56-8
41647 五味子醇乙 Schisandrol B 20mg/支 分子式:C23H28O7
分子量:416.47
41648 西紅花苷 Crocin 藏紅花素;番紅花苷 20mg/支 42553-65-1
41649 西紅花苷I Crocin I 20mg/支人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒 94238-00-3
41650 西紅花苷II Crocin II 20mg/支 55750-84-0
41651 桑色素 Morin hydrate 桑黃素 20mg/支 480-16-0;654055-01-3
41652 D-(-)-奎寧酸 D-(?)-Quinic acid 右旋奎寧酸;D-(-)-奎尼酸;奎寧酸;奎尼酸 20mg/支 77-95-2
41653 梓醇 Catalpol 20mg/支 2415-24-9
41654 根皮苷 Phlorizin 20mg/支 60-81-1
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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