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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
43332 * 含量測定 常溫,避光 約25mg/支 140629-200202
43333 * 含量測定 常溫,避光 100mg 140630-200602
43334 * 檢查 常溫,避光 50mg 140631-200904
43335 * 檢查 常溫,避光 100mg 140632-200502
43336 * 效價測定 -20℃,避光 20mg/27.9IU/mg 140633-200703
43337 *單體-二聚體 檢查 -20℃,避光 4mg 140634-200602
43338 * 含量測定 -20℃,避光 1.1mg 140635-200603
43339 *單體-二聚體 檢查 -20℃,避光 0.5mg 140636-200703
43340 右旋糖酐分子量D0 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140637-201002
43341 右旋糖酐分子量D1 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140638-201002
43342 右旋糖酐分子量D2 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140639-201002
43343 右旋糖酐分子量D3 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140640-201002
43344 右旋糖酐分子量D4 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140641-201002
43345 右旋糖酐分子量D5 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140642-201002
43346 右旋糖酐分子量D6 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140643-201002
43347 右旋糖酐分子量D7 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140644-201002
43348 右旋糖酐分子量D8 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140645-201002
43349 右旋糖酐分子量D2000 分子量測定 常溫,避光 0.2g/支 140646-201002
43350 低分子肝素 效價測定 -20℃,避光 140647-200801
43351 D-葡萄糖醛酸 UV法含量測定 常溫,避光 100mg 140648-200602
43352 D-* 含量測定 常溫,避光 200mg 140649-200702
43353 * 供*測定 -20℃,避光 2.6萬u 140650-200502
43354 D-甘露糖 含量測定 常溫,避光 100mg 140651-200602
43355 * 鑒別檢查 常溫,避光 100mg 140652-200401
43356 核糖核酸酶A 分子量測定 2-8℃,避光 1mg/支 140653-200802
43357 人胰島素 分子量測定 140654-200802
43358 *α1 分子量測定 140655-200802
43359 人生長激素釋放抑制因子 分子量測定 140656-200802
43360 甲酰化人生長激素 甲酰化人生長激素鑒別 -20℃,避光 2mg 140657-200301
43361 * HPLC法含量測定 常溫,避光 100mg 140658-200501
43362 * HPLC法含量測定 -20℃,避光 10mg 140659-200702
43363 氟尿苷 鑒別 常溫,避光 10mg 140660-200401
43364 次黃嘌呤 HPLC法含量測定 2-8℃,避光 20mg 140661-200903
43365 檢查 2-8℃,避光 20mg 140662-200301
43366 * HPLC法含量測定 -20℃,避光 5mg 140664-200501
43367 * 供含量 2-8℃,避光 10mg 140665-200902
43368 * HPLC法含量測定 4℃,避光 20mg 140667-200601
43369 D-核糖 含量測定 常溫,避光 10mg 140668-200301
43370 * HPLC法含量測定 常溫,避光 50mg 140669-200903
43371 乙酰半* 含量測定 常溫,避光 100mg 140671-200501
43372 N-乙酰-L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140672-200501
43373 * 供鑒別及含量測定用 常溫,避光 100mg 140673-201006
43374 * 鑒別 常溫,避光 10mg 140674-200401
43375 胞磷*鈉 HPLC法含量測定 常溫,避光 50mg 140675-200803
43376 L-* 含量測定 常溫,避光 50mg 140677-200405
43377 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140680-201002
43378 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140681-200401
43379 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140682-200401
43380 L-異* 含量測定 常溫,避光 100mg 140683-200401
43381 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140686-200401
43382 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140687-200401
43383 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140688-200401
43384 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140689-200401
43385 L-* 含量測定 常溫,避光 100mg 140691-200401
43386 * 鑒別 常溫,避光 200mg 人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒140692-200301
43387 L-鹽酸* 含量測定 常溫,避光 100mg 140693-200401
43388 * 供鑒別用 2-8℃,避光 2ml 140697-200602
43389 鹽酸半* 供鑒別與 常溫,避光 100mg 140699-201001
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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