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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
43696 阿扎哌隆標準品 Azaperone 200mg 1649-18-9
43697 馬來酸阿扎他定標準品 Azatadine Maleate 200mg 3978-86-7
43698 *標準品 Azathioprine 200mg 446-86-6
43699 *鑒別混合物標準品 75mg
43700 阿奇毒素相關物質H標準品 15mg
43701 *相關物質F標準品 25mg
43702 *標準品 Azithromycin 100mg 117772-70-0
43703 *標準品(定性用) Azithromycin Identity 75mg 83905-01-5
43704 *德糖胺標準品 Desosaminylazithromycin 15mg
43705 n-去甲基*標準品 N-Demethylazithromycin 15mg
43706 *-N-氧化物標準品 Azithromycin N-Oxide 15mg 90503-56-3
43707 偶氮-*標準品 Azo-aminoglutethimide 100mg
43708 *標準品 Aztreonam 200mg 78110-38-0
43709 *E異構體標準品 Aztreonam E-Isomer 50mg
43710 開環*標準品 Open Ring Aztreonam 15mg
43711 *標準品 Bacampicillin Hydrochloride 200mg 37661-08-8
43712 *標準品 1g 1405-87-4
43713 *鋅標準品 Bacitracin Zinc 200mg 1405-89-6
43714 *標準品 Baclofen 350mg 1134-47-0
43715 *相關物質A標準品 Baclofen Related Compound A 50mg 22518-27-0
43716 *標準品 Balsalazide Disodium 200mg 150399-21-6
43717 *相關物質A標準品 Balsalazide Related Compound A 100mg
43718 *相關物質B標準品 Balsalazide Related Compound B 25mg
43719 *標準品 Beclomethasone Dipropionate 200mg 5534/9/8
43720 山崳酰氧基聚氧甘油酯標準品 Behenoyl Polyoxylglycerides 500mg
43721 雙-乙基乙氧*甲氧苯基三嗪標準品 Bemotrizinol 200mg 187393-00-6
43722
雙-乙基乙氧*甲氧苯基三嗪相關物質混合物標準品
Bemotrizinol Impurity Mixture 100mg 86541-74-4
43723 *標準品 Benazepril Hydrochloride 125mg 86541-74-4
43724 貝那普利相關物質A標準品 15mg 215447-89-5
43725 貝那普利相關雜質B標準品 15mg
43726 貝那普利相關物質C標準品 50mg 86541-78-8
43727 貝那普利相關物質D標準品 15mg
43728 苯那普利相關化合物E標準品 25mg
43729 貝那普利相關物質F標準品 15mg 109010-60-8
43730 苯那普利相關化合物G標準品 15mg 103129-58-4
43731 芐氟噻嗪標準品 Bendroflumethiazide 200mg 73-48-3
43732 *標準品 Benoxinate Hydrochloride 200mg 5987-82-6
43733 苯甲醛標準品 Benzaldehyde (List Chemical) 1ml 100-52-7
43734 *標準品 5ml 8001-54-5
43735 芐索氯銨標準品 Benzethonium Chloride 500mg 121-54-0
43736 *標準品 Benzocaine 500mg 1994/9/7
43737 苯甲酸標準品 Benzoic Acid 300mg 65-85-0
43738 苯佐那酯標準品 Benzonatate 1g 104-31-4
43739 1,4-苯醌標準品 1,4-Benzoquinone 200mg 106-51-4
43740 苯并噻二嗪相關物質A標準品 100mg 121-30-2
43741 鹽酸*標準品人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試劑盒 200mg 5411-22-3
43742 甲磺酰苯扎托品標準品 Benztropine Mesylate 200mg 132-17-2
43743 苯甲醇標準品 Benzyl Alcohol 500mg 100-51-6
43744 苯甲酸芐酯標準品 Benzyl Benzoate 5g 120-51-4
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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