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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
45058 糖酸莫米松標準品 Mometasone Furoate 200mg 83919-23-7
45059 莫能菌素鈉鹽標準品 Monensin Sodium 200mg 22373-78-0
45060 莫諾苯宗標準品 Monobenzone 200mg 103-16-2
45061 乙醇胺標準品 Monoethanolamine 1ml 141-43-5
45062 單甘酯標準品 Monoglycerides 125mg 68990-53-4
45063 *一鈉標準品 Monosodium Glutamate (AS) 1g 142-47-2
45064 馬來酸單十八酯標準品 Monostearyl Maleate 100mg 2424-62-6
45065 *標準品 Monukast Sodium 150mg 151767-02-1
45066 酒石酸莫侖太爾標準品 Moran Tartrate 100mg 26155-31-7
45067 *標準品 Moricizine Hydrochloride 250mg 29560-58-5
45068 一水合*標準品 Morphine Monohydrate CII (AS) 50mg 6009-81-0
45069 *標準品 Moxifloxacin Hydrochloride 200mg 186826-86-8
45070 莫西沙星相關物質A標準品 25mg 151213-15-9
45071 *標準品 Mupirocin 50mg 12650-69-0
45072 *鈣標準品 Mupirocin Calcium 200mg 115074-43-6
45073 *鋰標準品 Mupirocin Lithium 100mg 73346-79-9
45074 *標準品 Mycophenolate Mofetil 200mg 128794-94-5
45075 *相關物質A標準品 15mg
45076 *相關物質B標準品 15mg 79081-87-1
45077 肉豆蔻酸標準品 Myristic Acid 200mg 544-63-8
45078 肉豆蔻醇標準品 Myristyl Alcohol 1g 112-72-1
45079 *標準品 Nabumetone 200mg 42924-53-8
45080 *相關物質A標準品 15mg 127053-22-9
45081 康格爾標準品 Nadolol 200mg 42200-33-9
45082 *標準品 Nafcillin Sodium 200mg 7177-50-6
45083 *標準品 Naftifine Hydrochloride 200mg 65473-14-5
45084 萘啶酮酸標準品 Nalidixic Acid 200mg 389-08-2
45085 鹽酸烯丙*標準品 Nalorphine Hydrochloride CIII 250mg 57-29-4
45086 納洛酮標準品 Naloxone 125mg 465-65-6
45087 鈉曲酮標準品 Naltrexone 200mg 16590-41-3
45088 鈉曲酮相關物質A標準品 30mg 131670-05-8
45089 諾龍標準品 Nandrolone CIII 50mg 434-22-0
45090 癸酸諾龍標準品 Nandrolone Decanoate CIII 250mg 360-70-3
45091 *標準品 Nandrolone Phenpropionate CIII 250mg 62-90-8
45092 *標準品 Naphazoline Hydrochloride 200mg 550-99-2
45093 萘標準品 Naphthalene 200mg 91-20-3
45094 *標準品 Naproxen 200mg 22204-53-1
45095 *鈉標準品 Naproxen Sodium 200mg 26159-34-2
45096 甲基鹽霉素標準品 Narasin 125mg 55134-13-9
45097 鹽酸那拉曲坦標準品 Naratriptan Hydrochloride 125mg 143388-64-1
45098 那拉曲坦混合物標準品 Naratriptan Resolution Mixture 20mg
45099 納他霉素標準品 Natamycin 200mg 7681-93-8
45100 *標準品 Nateglinide 200mg 105816-04-4
45101 *相關物質A標準品 Nateglinide Related Compound A 10mg 7077/5/6
45102 *相關物質B標準品人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒 10mg 105816-05-5
45103 *相關物質C標準品 5mg 105816-06-6
45104 近紅外系統適用性參考標準標準品 Near IR System Suitability ea
45105 萘法唑酮鹽酸鹽標準品 Nefazodone Hydrochloride 200mg 82752-99-6
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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