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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
45156 水楊酸乙基己酯標準品 Octisalate (Octyl Salicylate) 400mg 118-60-5
45157 *標準品 Ofloxacin 200mg 82419-36-1
45158 *相關物質A標準品 25mg 82419-52-1
45159 油酸標準品 Oleic Acid 1g 112-80-1
45160 油酰聚氧甘油酯標準品 Oleoyl Polyoxylglycerides 100mg
45161 油酸油醇酯標準品 Oleyl Oleate 0.5ml 3687-45-4
45162 橄欖油標準品 Olive Oil (AS) 1g 8001-25-0
45163 *標準品 Olanzapine 200mg 132539-06-1
45164 *相關物質A標準品 25mg 138564-59-7
45165 *相關物質B標準品 25mg 221176-49-4
45166 *雜質C標準品 5mg 174794-02-6
45167 *雜質A標準品 20mg 849206-43-5
45168 *標準品 Olopatadine Hydrochloride 150mg 140462-76-6
45169 奧洛他定相關物質B標準品 35mg 173174-07-7
45170 奧洛他定相關物質C標準品 35mg 55453-87-7
45171 *相關FG混合物標準品 25mg
45172 *標準品 Omeprazole 200mg 73590-58-6
45173 *相關物質A標準品 15mg 88546-55-8
45174 *鎂標準品 Omeprazole Magnesium 10mg 95382-33-5
45175 昂丹司瓊標準品 Ondansetron 300mg 99614-02-5
45176 *對照品標準品 Ondansetron Hydrochloride 300mg 103639-04-9
45177 *有關物質A標準品 50mg 119812-29-2
45178 *有關物質C標準品 30mg 27387-31-1
45179 昂丹司瓊雜質D標準品 30mg 99614-64-9
45180 昂丹司瓊分離度混合物標準品 Ondansetron Resolution Mixture 50mg
45181 奧比沙星標準品 Orbifloxacin 350mg 113617-63-3
45182 *標準品 Orlistat 200mg 96829-58-2
45183 *相關物質A標準品 25mg 104872-06-2
45184 *相關物質B標準品 10mg 19740-72-8
45185 *相關物質C標準品 25mg 791-28-6
45186 *相關物質D標準品 10mg 130793-27-0
45187 *相關物質E標準品 10mg
45188 枸櫞酸奧芬那君標準品 Orphenadrine Citrate 200mg 4682-36-4
45189 奧芬那君相關物質A標準品 50mg
45190 奧芬那君相關物質B標準品 20mg
45191 奧芬那君相關物質C標準品 20mg 10488-36-5
45192 磷酸奧斯他韋標準品 Oseltamivir Phosphate 200mg 204255-11-8
45193 奧塞米韋相關物質A標準品 Oseltamivir Related Compound A 10mg
45194 *標準品 Oxacillin Sodium 200mg 7240-38-2
45195 *對照品標準品 Oxaliplatin 125mg 61825-94-3
45196 *相關物質A標準品 100mg 6153-56-6
45197 *相關物質B標準品 15mg 66900-68-3
45198 *相關物質C標準品 20mg
45199 *相關物質D標準品 10mg 61758-77-8
45200 *相關物質F標準品 25mg 66845-32-7
45201 *標準品(系統使用性用) 25mg 61848-66-6
45202 氧雄龍標準品 Oxandrolone CIII 50mg 53-39-4
45203 氧雄龍相關物質A標準品人可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)ELISA試劑盒 20mg
45204 氧雄龍相關物質B標準品 20mg 4424-45-7
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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