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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
45304 苯*標準品 Phenobarbital CIV 200mg 1950/6/6
45305 *標準品 Phenol 500mg 108-95-2
45306 *標準品 Phenolphthalein 250mg 1977/9/8
45307 酚磺酞標準品 Phenolsulfonphthalein 100mg 143-74-8
45308 吩噻嗪標準品 Phenothiazine 500mg 92-84-2
45309 *標準品 Phenoxybenzamine Hydrochloride 250mg 63-92-3
45310 苯氧基乙醇標準品 500mg 122-99-6
45311 苯琥胺標準品 Phensuximide 500mg 86-34-0
45312 鹽酸*標準品 Phentermine Hydrochloride CIV 200mg 1197-21-3
45313 鹽酸酚妥拉明標準品 Phentolamine Hydrochloride 300mg 1973/5/2
45314 *標準品 Phentolamine Mesylate 200mg 65-28-1
45315 L-苯*標準品 L-Phenylalanine 200mg 63-91-2
45316 苯基苯并咪唑磺酸標準品 200mg 27503-81-7
45317 *標準品 Phenylbutazone 250mg 50-33-9
45318 鹽酸*標準品 * Hydrochloride 125mg 61-76-7
45319 苯乙醇標準品 Phenylethyl Alcohol 1ml 1960/12/8
45320 5-苯基海因標準品 5-Phenylhydantoin 100mg 89-24-7
45321 苯丙二醇標準品 Phenylpropanediol 100mg 1855-09-0
45322 重酒石酸*胺標準品 100mg 67244-90-0
45323 鹽酸*胺標準品 250mg 154-41-6
45324 柳酸苯酯熔點標準物標準品 500mg 118-55-8
45325 檸檬酸苯托沙敏標準品 Phenyltoloxamine Citrate 100mg 1176-08-5
45326 苯托沙敏相關物質A標準品 50mg
45327 苯妥英標準品 200mg 57-41-0
45328 苯妥英相關物質A標準品 Phenytoin Related Compound A 50mg 3060-50-2
45329 苯妥英相關物質B標準品 50mg 6802-95-5
45330 *標準品 Phenytoin Sodium 200mg 630-93-3
45331 *標準品 Phosphated Riboflavin 100mg 6184-17-4
45332 *標準品 350mg 8002-43-5
45333 磷酯酰乙醇胺標準品 100mg 39382-08-6
45334 磷酸標準品 Phosphoric Acid (AS) 1.5ml×3ampules 7664-38-2
45335 牛無細胞真皮基質參考顯微照片標準品 ea
45336 馴養老鼠嗜鉻細胞瘤參考照片標準品 ea
45337 可移植皮參考顯微照片標準品 ea
45338
人類成纖維細胞源性皮膚替代參考顯微照片標準品
ea
45339 人皮膚參考顯微照片標準品 ea
45340 水楊酸毒扁豆堿標準品 Physostigmine Salicylate 200mg 57-64-7
45341 *1標準品 Phytonadione (Vitamin K1) 500mg 84-80-0
45342 毛果蕓香堿標準品 Pilocarpine 300mg 92-13-7
45343 鹽酸毛果蕓香堿標準品 Pilocarpine Hydrochloride 200mg 54-71-7
45344 哌咪清標準品 Pimozide 200mg 2062-78-4
45345 心得樂標準品 Pindolol 200mg 13523-86-9
45346 鹽酸*標準品 Pioglitazone Hydrochloride 50mg 112529-15-4
45347 哌西他嗪標準品 Piperacetazine 250mg 3819-00-9
45348 *標準品 Piperacillin 500mg 66258-76-2
45349 哌嗪標準品人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒 Piperazine 200mg 110-85-0
45350 哌嗪己二酸鹽標準品 Piperazine Adipate 200mg 142-88-1
45351 枸椽酸哌嗪標準品 Piperazine Citrate 200mg 144-29-6
45352 哌嗪二鹽酸鹽標準品 Piperazine Dihydrochloride 200mg 142-64-3
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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