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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
45404 碳酸鉀標準品 Potassium Carbonate (AS) 1g 584-08-7
45405 氯化鉀標準品 Potassium Chloride (AS) 1g 7447-40-7
45406 檸檬酸鉀標準品 Potassium Citrate (AS) 1g 6100/5/6
45407 *標準品 Potassium Iodide (AS) 1g 7681-11-0
45408 山梨酸鉀標準品 Potassium Sorbate (AS) 1g 24634-61-5
45409 *標準品 Potassium Acetate (AS) 500mg 127-08-2
45410 酒石酸氫鉀標準品 Potassium Bitartrate (AS) 3g 868-14-4
45411 葡萄糖酸鉀標準品 Potassium Gluconate 200mg 299-27-4
45412 *標準品 Potassium Guaiacolsulfonate 500mg 78247-49-1
45413 磷標準品 5g 7758/11/4
45414 磷酸二標準品 5g 7778-77-0
45415 酒石酸鉀鈉標準品 2g 6381-59-5
45416 *鉀標準品 Potassium Sucrose Octasulfate 300mg 73264-44-5
45417 三氯氨絡鉑酸鉀標準品 20mg 13820-91-2
45418 交聯聚維酮標準品 Povidone 100mg 9003-39-8
45419 氯磷定標準品 Pralidoxime Chloride 200mg 51-15-0
45420 普拉克索相關物質A標準品 15mg 106092-09-5
45421 普拉克索相關物質D標準品 25mg 104632-28-2
45422 普拉克索鹽酸鹽標準品 200mg 191217-81-9
45423 鹽酸普莫卡因標準品 Pramoxine Hydrochloride 500mg 637-58-1
45424 普伐他汀1,1,3,3-四甲基氨基丁烷標準品 200mg 151006-14-3
45425 *標準品 Pravastatin Sodium 50mg 81131-70-6
45426 普伐他汀相關物質A標準品 15mg 81093-43-8
45427 普伐他汀相關物質B標準品 20mg 81176-41-2
45428 普拉西泮標準品 Prazepam CIV 500mg 2955-38-6
45429 *標準品 Praziquan 200mg 55268-74-1
45430 *相關物質A標準品 20mg 54761-87-4
45431 *相關物質B標準品 50mg 125273-86-1
45432 *相關物質C標準品 50mg 125273-88-3
45433 *標準品 Prazosin Hydrochloride 500mg 19237-84-4
45434 潑尼卡酯標準品 Prednicarbate 200mg 73771-04-7
45435 潑尼卡酯相關物質A標準品 20mg 671225-26-6
45436 潑尼卡酯相關物質B標準品 50mg 104286-02-4
45437 潑尼卡酯相關物質C標準品 20mg 5740-62-5
45438 *龍標準品 Prednisolone 200mg 50-24-8
45439 醋酸*龍標準品 Prednisolone Acetate 200mg 52-21-1
45440 *龍琥珀酸半酯標準品 Prednisolone Hemisuccinate 125mg 2920-86-7
45441 *龍磷酸鈉標準品 Prednisolone Sodium Phosphate 500mg 125-02-0
45442 *龍醋酸特丁酯標準品 Prednisolone Tebutate 200mg 7681-14-3
45443 *標準品 Prednisone 250mg 1953/3/2
45444 *片標準品 Prednisone Tablets 30tables
45445 *標準品 Prilocaine 200mg 721-50-6
45446 鹽酸*標準品 Prilocaine Hydrochloride 200mg 1786-81-8
45447 *相關物質A標準品 Prilocaine Related Compound A 100mg 636-21-5
45448 *相關物質B標準品 Prilocaine Related Compound B 50mg 744961-76-0
45449 *標準品 Primaquine Phosphate 200mg 63-45-6
45450 *標準品 Primidone 200mg 125-33-7
45451 *相關物質A標準品 20mg 7206-76-0
45452 *相關物質C標準品 20mg 90-26-6
45453 *標準品 Probenecid 200mg 57-66-9
45454 *標準品人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒 Probucol 200mg 23288-49-5
45455 *相關物質A標準品 25mg 2455-14-3
45456 *相關物質B標準品 25mg
45457 *相關物質C標準品 25mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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