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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
46470 Tau protein 微管相關蛋白(抗原) 0.5mg
46471 omerase (TE) 端粒酶(催化亞單位)(多肽抗原) 0.5mg
46472 TGF-Alpha (Ttansforming Growth Factor –Alpha) 轉移生長因子–α(抗原) 0.5mg
46473 CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗原 0.5mg
46474 Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG抗原 0.5mg
46475 TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1) 轉移生長因子–β1(抗原) 0.5mg
46476 CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II beita) 鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2b抗原 0.5mg
46477 CAP1/Park7/DJ-1 Park7/DJ-1/CAP1抗原 0.5mg
46478 CAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2) 環化酶相關蛋白CAP-2抗原 0.5mg
46479 TGF beta 2 Propeptide 轉移生長因子–β2前體肽 0.5mg
46480 TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3) 轉移生長因子–β3(抗原) 0.5mg
46481 TGF- Beta R2 peptide 轉移生長因子β受體2(多肽抗原) 0.5mg
46482 Thymosin Alpha-1 * α-1 (*-Thymosin alpha-1) 0.5mg
46483 Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽) 0.5mg
46484 Caspase-12(hunman) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人) 0.5mg
46485 TmR2(GDNFR Beta;TRN-R;GFR-alpha-2;NTNR-2) 膠質細胞系源性神經營養因子(多肽) 0.5mg
46486 TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha) 人腫瘤壞死因子-α(多肽抗原) 0.5mg
46487 rh-TNF-Alpha(rh-Tumor Necrosis Factor alpha) 重組人腫瘤壞死因子 100ug
46488 rh-TNF alpha protein GST Tagged 重組人腫瘤壞死因子 100ug
46489 TRA16 睪丸激素受體相關蛋白 0.5mg
46490 rh-IL-1Ra(Recombinant Human Interleukin-1 receptor antagonist His Tag) *-1受體拮抗劑 100ug
46491 rhBMP-2/BMP2 重組人骨形態發生蛋白-2 100ug
46492 rh-BMP-7/BMP7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7;rhBMP-7) 重組人骨形態發生蛋白7 100ug
46493 E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein) DH 5 alpha 大腸桿菌菌體蛋白 0.5mg
46494 Tranthyretin 甲狀腺素運載蛋白(抗原) 0.5mg
46495 rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor) * 0.1mg
46496 TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A) 神經生長因子的一種(抗原) 0.5mg
46497 rh-VEGF(GST Tag)(Recombinant Vascuoar endothelial growth factor) 重組人血管內皮細胞生長因子 0.1mg
46498 TrK A.B.C 神經生長因子的一種(抗原) 0.5mg
46499 active Caspase 3(caspase-3 p12 subunit) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗原 0.5mg
46500 r-GST(Recombinant Glutathione S-T Ahents) 重組*轉移酶GST標簽蛋白 0.1mg
46501 CASP4(Caspase-4) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗原 0.5mg
46502 Trk B 神經生長因子受體的一種(抗原) 0.5mg
46503 GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重組生長分化因子8/肌肉抑制素 0.1mg
46504 Trk B 神經生長因子受體的一種(抗原) 0.5mg
46505 Insulin protein (Active) *細胞因子 0.5mg
46506 Trk C 神經生長因子受體的一種(抗原) 0.5mg
46507 TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT) 促甲狀腺素受體(抗原) 0.5mg
46508 Caspase-8 (pro Mch5) 半*蛋白酶8抗原 0.5mg
46509 TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT) 促甲狀腺素受體(抗原) 0.5mg
46510 TY3H ( Tyrosine Hydroxylase ) *羥化酶(抗原) 0.5mg
46511 Tubulin-Alpha 微管蛋白(抗原) 0.5mg
46512 Cav-1/ETM1 peptide 細胞質膜微囊蛋白-1抗原 0.5mg
46513 Beta-catenin/ Beta-cats β-連環蛋白抗原(β-β鏈接素) 0.5mg
46514 p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 磷酸化β-連環蛋白抗原 0.5mg
46515 Tubulin- Beta 微管蛋白(抗原) 0.5mg
46516 NAIF1 protein( CB12-327) 核凋亡誘導因子蛋白1(多肽) 0.5mg
46517 cath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原 0.5mg
46518 cath-L/CL peptide 組織蛋白酶L抗原 0.5mg
46519 CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 成骨特異性轉錄因子(多肽) 0.5mg
46520 CBP(CREB-binding protein) CREB結合蛋白抗原 0.5mg
46521 CBX3/HP1 gamma 人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒染色盒同源物3抗原 0.5mg
46522 CBX5(Chromobox Homolog 5) CBX5(多肽) 0.5mg
46523 CC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗原 0.5mg
46524 CCR-2/5(CC chemokine receptor 2/5) CC趨化因子受體2/5抗原 0.5mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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