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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
46527 CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬細胞炎性蛋白1β抗原 0.5mg
46528 MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 巨噬細胞炎性蛋白3α抗原 0.5mg
46529 CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核細胞趨化蛋白5抗原 0.5mg
46530 CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14) 嗜酸粒細胞趨化蛋白14抗原 0.5mg
46531 ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原 0.2mg
46532 MIP-3 beta/ELC/CCL19(Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta) 巨噬細胞炎性蛋白19抗原 0.5mg
46533 CCL26(Eotaxin 3) 嗜酸粒細胞趨化蛋白3抗原 0.5mg
46534 CCR-1(CC chemokine receptor 1) 細胞表面趨化因子受體1抗原 0.5mg
46535 CCR-3(CC chemokine receptor 3) CC趨化因子受體3抗原 0.5mg
46536 CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A) 細胞表面趨化因子受體2A抗原 0.5mg
46537 CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細胞表面趨化因子受體4抗原 0.5mg
46538 CCR-6/CD196 peptide 細胞表面趨化因子受體6抗原 0.5mg
46539 CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide 細胞表面趨化因子受體6抗原 0.5mg
46540 CCR-7(CC chemokine receptor 7) CC趨化因子受體7(多肽) 0.5mg
46541 CXCL10/IP-10 CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗原 0.5mg
46542 VEGF(Vascular endothelial growth factor) 血管內皮生長因子(多肽抗原) 0.5mg
46543 CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) CD10抗原 0.5mg
46544 ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1) ZCWCC1抗原 0.5mg
46545 CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉化生長因子β受體抗原 0.5mg
46546 CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原 0.5mg
46547 CD146/MCAM 黑色素瘤細胞粘附分子CD146抗原 0.5mg
46548 ANPEN/CD13(Aminopeptidase N) 氨肽酶N抗原 0.5mg
46549 CD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/內毒素受體抗原 0.5mg
46550 CD28 CD28抗原 0.5mg
46551 CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白細胞粘附分子抗原 0.5mg
46552 CD177/NB1 peptide 嗜中性粒細胞抗原CD177抗原 0.5mg
46553 CD24 CD24抗原 0.5mg
46554 CD2AP (CD2-associated protein) 白細胞分化抗原CD2AP 0.5mg
46555 CD33 peptide(human) CD33抗原(人) 0.5mg
46556 CD33/Siglec-3(mouse ret) CD33抗原(大、小鼠) 0.5mg
46557 CD34 CD34抗原(細胞表面的唾液粘蛋白) 0.5mg
46558 CD38(mouse, rat) CD38多肽(小鼠、大鼠) 0.5mg
46559 CD38(human) CD38抗原(人) 0.5mg
46560 CD36 CD36(多肽) 0.5mg
46561 CD7 CD7抗原 0.5mg
46562 CD40L(CD40 Ligand/TNFSF5/CD154) CD40L抗原 0.5mg
46563 CD44 CD44抗原 (多肽抗原) 0.5mg
46564 Argireline peptide 抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3 1g
46565 GHRP-2 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 2) 醋酸促生長激素釋放肽2 1g
46566 GHRP-6 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 6) 醋酸促生長激素釋放肽6 1g
46567 Matrixyl Acetate 五勝肽/美容肽—M肽 1g
46568 MT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉諾坦II 1g
46569 Pentapeptide-3/Leuphasyl 五勝肽 1g
46570 PT141(Bremelanotide PT-141) 雌性激素肽 1g
46571 CD45 CD45(白細胞共同抗原) 0.5mg
46572 CD46/MCP(membrane cofactor protein)rat, mouse 膜輔蛋白/內源性輔助因子活性蛋白抗原 0.5mg
46573 CD5 CD5 多肽抗原 0.5mg
46574 ICAM-2/CD102(intercellular adhesion molecules-2) 細胞間粘附分子-2抗原 0.5mg
46575 CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1) 神經細胞粘附分子1抗原 0.5mg
46576 CD62L (ELAM-1/L-Selectin ) L選擇素抗原 0.5mg
46577 E-Selectin E選擇素抗原人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒 0.5mg
46578 CD80/B7-1(human) 人刺激分子B7-1蛋白抗原 0.5mg
46579 CD80/B7-1 刺激分子B7-1蛋白抗原 0.5mg
46580 CD82/KAI1 peptide 腫瘤轉移抑制蛋白1抗原 0.5mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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