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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
46636 CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2) 二氫嘧啶酶樣2CRMP2抗原 0.5mg
46637 CRLR/CALCRL(calcitonin receptor like precursor) 降鈣素受體樣蛋白抗原 0.5mg
46638 cRaf/Raf1(c-raf 1) cRaf/Raf1抗原 0.5mg
46639 MEK1/MAPKK1(mitogen activated protein kinase kinase 1) MEK1/MAPKK1抗體(N-端) 0.5mg
46640 CRF (Corticotropin-Releasing Factor) 促腎上腺皮質激素釋放因子 0.5mg
46641 CSIG(cellular senescence inhibited gene) 細胞衰老抑制基因抗原 0.2ml
46642 Cripto-1(N-Terminus) 畸胎瘤衍化生長因子抗原(表皮生長因子相關肽)N端 0.5mg
46643 Cripto-1(C-Terminus) 畸胎瘤衍化生長因子抗原(表皮生長因子相關肽)C端 0.5mg
46644 Anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii) 環子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗原 0.5mg
46645 Calcitonin 降鈣素抗原 0.5mg
46646 CTBP1(C-terminal binding protein 1) C端結合蛋白1抗原 0.5mg
46647 CTLA-4/CD152 淋巴細胞相關抗原4/細胞毒性T細胞抗原-4 0.5mg
46648 CTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白 0.5mg
46649 Cx32(Connexin-32) 間隙連接蛋白32抗原 0.5mg
46650 CX36 (Connexin-36) 間隙連接蛋白36抗原 0.5mg
46651 Cx40 (Connexin-40) 間隙連接蛋白40(多肽) 0.5mg
46652 cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1) 趨化因子(C-X3-C 基元)配體1抗原 0.5mg
46653 CX3CR1(CX3C-chemokine receptor 1) CX3C趨化因子受體1抗原 0.5mg
46654 Cyclin A 周期素A抗原 0.5mg
46655 Cyclin B1 周期素B1抗原 0.5mg
46656 Cyclin D2 周期素D2抗原 0.5mg
46657 Cyclin D3(C-term) 周期素D3抗原 0.5mg
46658 CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 細胞色素P450 3A4抗原 0.5mg
46659 Cyr61/IGFBP10/CCN1(cysteine rich 61) 富半*肝素結合蛋白61抗原 0.5mg
46660 HCMV UL23/HHV5 UL23(Human Cytomegalovirus UL23 Gene) 人巨細胞病毒UL23抗原 0.5mg
46661 DAD1 (dopamine D1 receptor) 多巴胺受體-D1抗原 1mg
46662 DRD3 receptor(dopamine D3 receptor) 多巴胺受體-D3抗原 0.5mg
46663 DRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原 0.5mg
46664 DRD5 receptor(dopamine D5 receptor) 多巴胺受體-D5抗原 0.5mg
46665 DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase) 多巴胺β羥化酶(抗原) 0.5mg
46666 DCC (Deleted in colorectal cancer gene) 結直腸癌缺失基因抗原 0.5mg
46667 DCX(Doublecortin) 雙皮質素抗原 0.5mg
46668 DDB2(DNA damage-binding protein 2) 損傷DNA結合蛋白2抗原 0.5mg
46669 Defensin Beta1 防御素β1抗原 0.5mg
46670 Defensin Beta1(human) 防御素β1抗原(人) 0.5mg
46671 Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(mouse) 防御素β2抗原(小鼠) 0.5mg
46672 Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠) 0.5mg
46673 DAPK1(Death associated protein kinase 1) 凋亡相關蛋白激酶1抗原 0.5mg
46674 DHAV(duck hepatitis A virus) 鴨甲型肝炎A病毒抗原 0.5mg
46675 Des(Desmin) 結蛋白抗原 0.5mg
46676 DKK1(Dickkopf 1) 抑癌蛋白DKK1抗原 0.5mg
46677 DMBT1 (Deleted in malignant brain tumor 1) DMBT1抑癌基因抗原 0.5mg
46678 DNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原 0.5mg
46679 DPPA2 (developmental pluripotency associated gene2) 多能發育相關基因2抗原 0.5mg
46680 DR4/APO2/TRAILR1 (Death receptor 4) 死亡受體4抗原 0.5mg
46681 DR5/TNFRSF10B/CD262 (Death receptor 5) 腫瘤細胞調亡素/死亡受體5抗原 0.5mg
46682 DP-I/DSP(desmoplakin I ) 橋粒斑蛋白1抗原 0.5mg
46683 DVL1 (dishevelled 1) 蓬亂蛋白1 0.5mg
46684 Dynamin 2(Anti-Human Dynamin-2 ) 鳥苷三磷酸酶-發動蛋白2抗體 0.5mg
46685 Nadrin peptide 發育調節蛋白多肽抗原 0.5mg
46686 E2F1 轉錄因子E2F-1人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒 0.5mg
46687 E2F2 轉錄因子E2F-2抗原 0.5mg
46688 E2F4 轉錄因子E2F-4抗原 0.5mg
46689 E2F6 轉錄因子E2F-6抗原 0.5mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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