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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
47779 Adiponectin Receptor 1 脂聯素受體1抗體 0.2ml
47780 Salmonella typhimurium 鼠傷* 0.2ml
47781 Salmonella paratyphi a *抗體 0.2ml
47782 Salmonella enteritidis/SE 腸炎沙門氏菌抗體 0.2ml
47783 pig cholerae salmonella 豬霍亂沙門氏菌抗體 0.2ml
47784 Duck salmonella 鴨沙門氏菌抗體 0.2ml
47785 USP3 去泛素化酶3抗體 0.2ml
47786 ATXN3L 小腦脊髓共濟失調蛋白3抗體 0.2ml
47787 Endomucin 內皮粘蛋白EMCN抗體 0.2ml
47788 KLK3/Prostate Specific Antigen *3/*3抗體 0.2ml
47789 H5N1-H5 H5亞型全病毒抗體 0.1ml
47790 Newcastle disease virus 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒)抗體 1ml
47791 CD3 epsilon CD3抗體 0.1ml
47792 CD3 epsilon CD3抗體 0.1ml
47793 CD4 CD4抗體 0.1ml
47794 CD45/B220 白細胞共同抗原抗體 0.1ml
47795 CD45/B220 白細胞共同抗原抗體 0.1ml
47796 CD45/B220 白細胞共同抗原抗體 0.1ml
47797 AFP 甲胎蛋白AFP抗體 0.1ml
47798 CD83 CD83抗體 0.2ml
47799 CD73/NT5 CD73抗體 0.2ml
47800 MAL/MPV17 T淋巴細胞成熟相關蛋白抗體 0.2ml
47801 CXC-R2 CXCR2/CD182 0.1ml
47802 HE4 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml
47803 nonstructural protein 1/NS1 A型流感病毒-NS1抗體(神經氨酸酶1) 0.2ml
47804 Factor VII *7抗體 0.1ml
47805 phospho-ITGB4(Tyr1530) 磷酸化整合素β4抗體 0.1ml
47806 phospho-RUNX3(Ser338) 磷酸化Runx3抗體 0.1ml
47807 GLUT2 葡萄糖轉運蛋白2 0.1ml
47808 Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 0.1ml
47809 Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 0.1ml
47810 PIM3 */*蛋白激酶PIM3抗體 0.2ml
47811 Hepatitis C Virus NS5a 丙型肝炎病毒NS5A抗體 0.1ml
47812 Hepatitis C Virus NS4B 丙型肝炎病毒NS4B抗體 0.1ml
47813 Hepatitis C Virus RNA-directed RNA polymerase 丙型肝炎病毒NS4B(65kDa)抗體 0.1ml
47814 SORBS2/ArgBP2 *結合蛋白2抗體 0.2ml
47815 BNP 腦鈉素/利鈉肽抗體 0.2ml
47816 p70 S6 kinase beta 核糖體蛋白S6激酶1抗體 0.2ml
47817 CD20 CD20抗體 0.1ml
47818 Complement C3 beta chain 補體C3b抗體 0.1ml
47819 C3a/C3a anaphylatoxin 補體C3a過敏毒素抗體 0.1ml
47820 Complement C3b alpha' chain 補體C3b-α鏈抗體 0.1ml
47821 CD33/Siglec-3 CD33抗體 0.1ml
47822 TREM1 髓系細胞觸發受體1抗體 0.2ml
47823 CD24 CD24抗體 0.1ml
47824 CD24 CD24抗體 0.1ml
47825 APOE/Apo E2 載脂蛋白E抗體 0.1ml
47826 PIRH2 泛素連接酶抗體 0.1ml
47827 Calponin 1/2/3 鈣結合蛋白Calponin抗體 0.2ml
47828 SORBS2/ArgBP2 *結合蛋白2抗體 0.2ml
47829 SLC40A1/FPN1 細胞膜鐵轉運蛋白FP1抗體 0.1ml
47830 TGF beta 3 轉移生長因子β3(TGFβ3)抗體 0.1ml
47831 TGF beta 1/LAP 人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒轉化生長因子β(TGFβ)抗體 0.1ml
47832 TGF beta 2 轉化生長因子β2(TGFβ2)抗體 0.1ml
47833 MCSF/M-CSF 巨噬細胞克隆刺激因子抗體 0.1ml
47834 Reg3 beta 胰島β細胞生長因子Reg IIIα 抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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