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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-09 16:36:21瀏覽次數(shù):203次
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人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
48348 FAM129A/Cell growth inhibiting gene 39 protein 細(xì)胞生長抑制基因39蛋白抗體 0.2ml
48349 FOLH1B 細(xì)胞生長抑制蛋白26抗體(前列腺特異性膜抗原樣蛋白) 0.2ml
48350 GCET2 生發(fā)中心B淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
48351 HDGF 肝癌衍生生長因子抗體(高遷移率族蛋白1樣蛋白2抗體) 0.2ml
48352 HOXB2 同源盒蛋白B2抗體 0.1ml
48353 HOXB8 同源盒蛋白B8抗體 0.2ml
48354 HSPA6 熱休克蛋白70家族蛋白6抗體 0.2ml
48355 Id1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體 0.2ml
48356 LAPTM4B 溶酶體蛋白跨膜β4抗體 0.2ml
48357 LDOC1/BCUR1 癌癥*拉鏈下調(diào)因子1抗體 0.2ml
48358 LOXL2 賴氨酰氧化酶相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
48359 LRRN5 富含*重復(fù)神經(jīng)元5抗體 0.2ml
48360 Lipophilin B 親脂性蛋白B抗體 0.2ml
48361 MAG1 肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
48362 MARVELD1 候選腫瘤抑制基因MARVELD1抗體 0.2ml
48363 MOBK1B/C2orf6 2號染色體開放閱讀框6抗體 0.2ml
48364 MTCP1 成熟T淋巴細(xì)胞增殖蛋白1抗體 0.2ml
48365 Mimitin MYC誘導(dǎo)線粒體蛋白抗體 0.2ml
48366 NANOGP8 干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體 0.2ml
48367 NOL8 核仁蛋白8抗體 0.2ml
48368 NUP88 核孔復(fù)合體蛋白88抗體 0.2ml
48369 OCC1 結(jié)腸癌過度表達(dá)蛋白1抗體 0.2ml
48370 OCIAD2 卵巢癌免疫反應(yīng)抗原抗體 0.2ml
48371 OLFM4 凋亡蛋白OLFM44抗體 0.2ml
48372 ORAV1 口腔癌高表達(dá)的蛋白1抗體 0.2ml
48373 ORP4/OSBP2 氧化固醇結(jié)合蛋白4抗體 0.2ml
48374 PAGE1 前列腺相關(guān)P抗原家族成員1抗體 0.2ml
48375 PAI1/PLANH1/Serpine 1 內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體 0.2ml
48376 NMT1 豆蔻酰基轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
48377 GPR171/Plaet Activating Receptor H963 G蛋白偶聯(lián)受體171抗體 0.2ml
48378 POT1 端粒保護(hù)蛋白1抗體 0.2ml
48379 PRSS3 腦*3抗體 0.2ml
48380 HDBP2/PTTG1IP 乳頭瘤病毒調(diào)控因子1抗體(鋅指蛋白395) 0.2ml
48381 PCANAP2/Prostein 前列腺癌相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
48382 RLBP1L1 *結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
48383 RING5 環(huán)指蛋白5抗體(E3泛素蛋白連接酶RNF5) 0.2ml
48384 RPL15 核糖體蛋白L15抗體 0.2ml
48385 RPL19 核糖體蛋白L19抗體 0.2ml
48386 RPL5 核糖體蛋白L5抗體 0.2ml
48387 RRBP1 核糖體結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
48388 S100A7/Psoriasin S100鈣結(jié)合蛋白A7抗體 0.2ml
48389 RBBP6 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白6抗體 0.2ml
48390 S100PBP/S100P binding protein S100P結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
48391 SAMD14 SAMD14抗體 0.2ml
48392 CDMP1/GDF5 軟骨衍生形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體 0.2ml
48393 RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2) 磷酸化RNA聚合酶II CTD抗體 0.1ml
48394 RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S5) 磷酸化RNA聚合酶II CTD抗體 0.1ml
48395 RNASE4/Angiogenin 血管生成素核糖核酸酶4抗體(肌萎縮性側(cè)索硬化癥蛋白) 0.1ml
48396 DUT 脫氧尿苷三磷酸酶DUT抗體 0.1ml
48397 Desmoglein 3/DSG3 橋粒芯蛋白3抗體 0.1ml
48398 FCAR/CD89 免疫球蛋白A Fc段受體1抗體 0.1ml
48399 APEX2 嘌呤嘧啶核酸內(nèi)切酶2抗體人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒 0.1ml
48400 ADAMTS10 整合素樣金屬蛋白酶與*10型抗體 0.1ml
48401 BCAT2/BCAM 支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶2抗體 0.1ml
48402 Bcl2A1 BCL2相關(guān)蛋白A1抗體 0.1ml
48403 Bcl3 B細(xì)胞淋巴瘤蛋白3抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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