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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
48744 TAPA1/CD81 CD81抗體 0.1ml
48745 HAND2 心臟和神經嵴衍生蛋白2抗體 0.1ml
48746 MYF5 生肌決定因子Myf5抗體 0.1ml
48747 SCC112/PIG54 細胞增殖誘導蛋白54抗體 0.1ml
48748 EBNA1/EBV Nuclear Antigen EB病毒核抗原1抗體 0.2ml
48749 β-synuclein/SNCB 核突觸蛋白β抗體 0.2ml
48750 KDEL (ER Marker) 賴氨酸,天冬氨酸,*,*相關序列抗體 0.2ml
48751 RAG1/RNF74 環指蛋白74抗體(重組激活基因1) 0.2ml
48752 POMC 阿黑皮素原抗體 0.1ml
48753 FBXL11 FBXL11蛋白抗體 0.2ml
48754 ASAP1/DDEF1 發育分化增強因子1抗體 0.1ml
48755 phospho-ER-beta(ser87) 磷酸化雌激素受體β抗體 0.1ml
48756 phospho-ASAP1/DDEF1(Tyr782) 磷酸化發育分化增強因子1抗體 0.1ml
48757 RAG2 重組激活基因2蛋白抗體 0.2ml
48758 ASMTY/HIOMT 松果體N甲基乙酰羥色胺抗體 0.2ml
48759 GNAO1/G0 Protein alpha G蛋白偶聯受體結合蛋白O亞基A2抗體 0.2ml
48760 LPAP 淋巴細胞磷蛋白磷酸酶相關蛋白抗體 0.1ml
48761 PMA/Prostate Mucin Antigen 前列腺粘蛋白抗原抗體 0.2ml
48762 SEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗體 0.2ml
48763 p47-phox NADPH氧化酶活化蛋白p47抗體 0.2ml
48764 Ankyrin B/Ankyrin brain 錨定蛋白B抗體 0.2ml
48765 FOXN1 叉頭蛋白N1抗體 0.2ml
48766 Pol II/RNA polymerase II RNA聚合酶II抗體 0.2ml
48767 Mkl1/MRTF-A myocardin相關轉錄因子抗體 0.2ml
48768 Dlx5 同源轉錄因子DLX5抗體 0.2ml
48769 FXR2 脆性X相關蛋白2抗體 0.2ml
48770 PLC β1/Phospholipase C beta 1 磷酯酶Cβ1抗體 0.2ml
48771 EHZF/ZN521 鋅指蛋白521抗體 0.1ml
48772 hnRNP R 異質性核糖核蛋白R 0.2ml
48773 AKAP5 A激酶錨定蛋白5抗體 0.2ml
48774 CLCN3/CLC-3 氯離子通道蛋白3抗體 0.2ml
48775 Neutrophil Elastase/ELANE 中性粒細胞彈性蛋白酶ELANE抗體 0.2ml
48776 WT-1/Wilms Tumor Protein 腎母細胞瘤蛋白抗體 0.1ml
48777 CBFb/PEBP2B 多瘤病毒增強了結合蛋白2β抗體 0.2ml
48778 BRN3B/POU4F2 腦特定蛋白Brn3B抗體 0.2ml
48779 HSPBAP1 熱休克蛋白27相關蛋白1抗體 0.2ml
48780 C12orf23 第12號染色體開放閱讀框23抗體 0.2ml
48781 RUBISCO 核酮糖1,5二磷酸羧化酶抗體 0.1ml
48782 G6PDH/H6PD 己糖6磷酸脫氫酶抗體 0.2ml
48783 γ-Catenin γ-連環素/連接蛋白γ抗體 0.2ml
48784 Thrap3/TRAP150 甲狀腺激素受體相關蛋白3抗體 0.2ml
48785 PRMT5 組蛋白*甲基轉移酶5抗體 0.2ml
48786 ELL2 聚合酶延伸因子2抗體 0.2ml
48787 Escherichka coli K88-K99/ETECK88 豬源產腸毒素性大腸桿菌K88-K99抗體 0.2ml
48788 CSTF2T/CstF-64 細胞分裂相關蛋白CSTF64抗體 0.2ml
48789 O-GlcNAc transferase O位N-乙酰葡萄糖胺OGT抗體 0.2ml
48790 SAP62 剪接體相關蛋白62抗體 0.2ml
48791 ERR-alpha 雌激素受體相關蛋白α抗體 0.2ml
48792 DCHS1 鈣粘蛋白19抗體 0.2ml
48793 AXL/UFO 粘附相關激酶抗體 0.1ml
48794 Delta Catenin δ連環蛋白/δ連環素/δ鏈接素抗體(δ-catenin) 0.2ml
48795 OCIAD1 卵巢癌免疫反應抗原抗體人足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒 0.2ml
48796 PAGE4/GAGE9 前列腺癌相關蛋白4抗體 0.2ml
48797 PMPCB 線粒體導肽水解酶β抗體 0.2ml
48798 PRAME 黑色素瘤優先表達抗原抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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