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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
48800 RASD2/Tumor endothelial marker 2 腫瘤血管內皮標記蛋白2抗體 0.2ml
48801 RNF43 環指蛋白43抗體 0.2ml
48802 RPLP2 酸性核糖體磷蛋白P2抗體 0.2ml
48803 SART3 T淋巴細胞識別的鱗狀細胞癌SART3抗體 0.2ml
48804 SDCCAG10 結腸癌抗原10抗體 0.2ml
48805 SDCCAG8 結腸癌抗原8抗體 0.2ml
48806 SPANX 腫瘤/睪丸抗原11.3抗體 0.1ml
48807 SSX5 滑膜肉瘤X斷點蛋白5抗體 0.2ml
48808 STEAP4/TNFAIP9 腫瘤壞死因子α誘導蛋白9/前列腺六跨膜上皮抗原4抗體 0.2ml
48809 STK31 */*蛋白激酶31抗體 0.2ml
48810 UTP14A/SDCCAG16 結腸癌抗原16抗體 0.2ml
48811 XAGE2 腫瘤/睪丸抗原12家族2抗體 0.2ml
48812 ITIH1 衍生透明質酸相關蛋白抗體 0.2ml
48813 GBP5/Guanylate binding protein 5 *核苷酸結合蛋白5抗體 0.2ml
48814 IFNA17/Interferon alpha 17/IFNA88 干擾素α17抗體 0.2ml
48815 IFNA21/IFNA F 干擾素α21抗體 0.2ml
48816 IFNAR2/IFNABR 干擾素α受體2抗體 0.2ml
48817 IFNA11/Limitin/Interferon alpha 11 干擾素α11抗體 0.2ml
48818 IFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C 干擾素α10抗體 0.2ml
48819 Otoraplin/OTOR/Fibrocyte derived protein 纖維細胞源性蛋白 0.2ml
48820 HSP10/CPN10 熱休克蛋白10抗體 0.2ml
48821 ANGPTL6 血管生成素相關蛋白6抗體 0.2ml
48822 RCAN2/DSCR1L1 鈣調神經磷酸酶調節蛋白2抗體(唐氏綜合征候選區域蛋白1樣蛋白1) 0.1ml
48823 EDIL3 表皮生長因子樣重復折疊1結構域蛋白3抗體 0.2ml
48824 GLMN/FK506 binding protein associated protein FK506結合蛋白相關蛋白抗體(*相關蛋白) 0.2ml
48825 Aryl Hydrocarbon Receptor/AHR 芳香烴受體抗體 0.2ml
48826 MEOX 2 間充質同源盒蛋白2抗體 0.2ml
48827 EphA3/Eph receptor A3 *蛋白激酶受體A3抗體 0.2ml
48828 EphA6/Eph receptor A6 *蛋白激酶受體A6抗體 0.2ml
48829 EphA7/Eph receptor A7 *蛋白激酶受體A7抗體 0.2ml
48830 EphA8/Eph receptor A8 *蛋白激酶受體A8抗體 0.2ml
48831 EphB1/Eph receptor B1 *蛋白激酶受體B1抗體 0.2ml
48832 phospho-EphB1/Eph receptor B1(Tyr317) 磷酸化*蛋白激酶受體B1抗體 0.1ml
48833 phospho-EphB1/Eph receptor B1(Tyr331) 磷酸化*蛋白激酶受體B1抗體 0.1ml
48834 Kidins220 220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體 0.2ml
48835 phospho-Kidins220 (Ser918) 磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體 0.1ml
48836 ELF1/E74 like factor 1 轉錄因子ELF1抗體 0.2ml
48837 Ephrin B3 *蛋白激酶B3抗體 0.2ml
48838 EphB1+EphB2 *蛋白激酶受體B1+B2抗體 0.2ml
48839 EphB1+EphB2+EphB3+EphB4 *蛋白激酶受體B1+B2+B3+B4抗體 0.2ml
48840 ANGPTL5 血管生成素相關蛋白5 0.2ml
48841 FGF11 成纖維細胞生長因子11抗體 0.2ml
48842 INPPL1 肌醇聚磷酸鹽磷酸酶樣蛋白1抗體 0.2ml
48843 TNFAIP2 腫瘤壞死因子誘導蛋白2(TNFα-IP 2)抗體 0.2ml
48844 CMG1 毛細管形態發生蛋白1抗體 0.2ml
48845 DENTT 細胞分裂核仁蛋白1抗體 0.2ml
48846 phospho-Myosin light chain(Ser20) 磷酸化肌球蛋白輕鏈抗體 0.1ml
48847 ELOVL2 長鏈脂肪酸延長酶ELOVL2抗體 0.2ml
48848 ELOVL5 長鏈脂肪酸延長酶長ELOVL5抗體 0.2ml
48849 ELOVL6 長鏈脂肪酸延長酶長ELOVL6抗體 0.2ml
48850 FTO/Protein fatso 脂肪堆積和肥胖相關蛋白抗體 0.2ml
48851 GCKR/Glucokinase regulatory protein 葡萄糖激酶調節蛋白抗體 0.2ml
48852 MMP-9 基質金屬蛋白酶9抗體人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒 0.1ml
48853 NT5C1A 胞質5'核苷酸酶1A抗體 0.2ml
48854 FAIM1 FAS凋亡抑制分子1抗體 0.2ml
48855 DEDD1 死亡效應結構域蛋白1抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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