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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
48968 TRIB3/p65 interacting inhibitor of NF-kappaB 神經細胞死亡誘導蛋白激酶抗體 0.1ml
48969 SERCA1 ATPase 肌漿/內質網鈣ATP酶1抗體 0.2ml
48970 GRK5 G蛋白偶聯受體激酶5抗體 0.2ml
48971 EDG3 內皮分化型G蛋白偶聯受體3抗體 0.2ml
48972 TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3 腫瘤壞死因子α誘導相互作用蛋白3抗體 0.2ml
48973 RISC/Serine carboxypeptidase 1 *羧肽酶1抗體 0.2ml
48974 APS APS抗體 0.1ml
48975 SOAT1/ACAT1 *酰基轉移酶1抗體 0.2ml
48976 phospho-APS(Ser598) 磷酸化APS抗體 0.1ml
48977 Scavenger Receptor BII 清道夫受體B2抗體 0.2ml
48978 CD239 B細胞粘附分子CD239抗體 0.2ml
48979 AP2 alpha 轉錄激活蛋白2α抗體 0.1ml
48980 CPB2/Carboxypeptidase B2 胰羧肽酶B2抗體 0.2ml
48981 Fibrinopeptide A 纖維蛋白肽A/血纖肽抗體 0.2ml
48982 GAS 6 生長停滯特異性蛋白6抗體 0.2ml
48983 AUP1/Ancient ubiquitous protein 1 原始廣泛存在蛋白1抗體 0.2ml
48984 Biglycan 骨/軟骨蛋白多糖1抗體 0.2ml
48985 ALT1 谷*氨基轉移酶1抗體 0.1ml
48986 Eph receptor A2+A3+A4 內皮細胞受體蛋白*激酶A2+A3+A4抗體 0.2ml
48987 phospho-Eph receptor A2+A3+A4 (Tyr588 + Tyr596) 磷酸化內皮細胞受體蛋白*激酶A2+A3+A4抗體 0.1ml
48988 phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內皮細胞受體蛋白*激酶A3+A4+A5抗體 0.1ml
48989 FLAP/5-lipoxygenase activating protein 5脂氧合酶激活蛋白抗體 0.2ml
48990 IKK alpha + IKK beta KB抑制蛋白激酶α/β抗體 0.2ml
48991 MC3 Receptor 黑素皮質素受體3抗體 0.2ml
48992 PDGF AB+BB 血小板源性生長因子AB+BB抗體 0.2ml
48993 CPLA2 胞漿型磷脂酶A2抗體 0.2ml
48994 TIRAP 白細胞介素1受體銜接蛋白抗體 0.2ml
48995 phospho-TIRAP(Tyr86) 磷酸化白細胞介素1受體銜接蛋白抗體 0.1ml
48996 TNIP2/ABIN2/TNFAIP3 interacting protein 2 腫瘤壞死因子α誘導蛋白3相互作用蛋白2抗體 0.2ml
48997 Azurocidin/Cationic antimicrobial protein 37 肝素結合蛋白/陽離子抗菌蛋白37/天青殺素抗體 0.2ml
48998 AGPB/Alpha 1 acid glycoprotein 2 α1酸性糖蛋白2抗體(類粘蛋白2) 0.2ml
48999 RHBDD3 垂體瘤細胞凋亡抗體 0.2ml
49000 RIP1 受體相互作用蛋白激酶1抗體 0.2ml
49001 RNF122 環指蛋白122抗體 0.2ml
49002 RNF36 環指蛋白36抗體 0.2ml
49003 RNF7/CKBBP1 環指蛋白7抗體 0.2ml
49004 RPS3 核糖體蛋白S3抗體 0.2ml
49005 RRAGC RAS相關GTP結合蛋白C抗體 0.2ml
49006 SAA4/Serum amyloid A 4 protein 血清淀粉樣蛋白4抗體 0.2ml
49007 RRAS 原癌基因R-Ras抗體 0.2ml
49008 SEC14 like protein 2/Squalene transfer protein α*相關蛋白抗體 0.2ml
49009 SEN1/ 細胞衰老相關蛋白1抗體 0.2ml
49010 SLC25A6 線粒體載體腺嘌呤核苷酸轉運蛋白6抗體 0.2ml
49011 SODD Bcl2結合抗凋亡蛋白4抗體 0.2ml
49012 TXNDC5 硫氧還蛋白5抗體 0.2ml
49013 ZFAND5 AN1型鋅指蛋白5抗體 0.2ml
49014 ZHX2/Alpha fetoprotein regulator 1 甲胎蛋白調節蛋白1抗體 0.2ml
49015 BCL2L15 BCL2樣15促凋亡蛋白抗體 0.2ml
49016 BTF/BCLAF1 Bcl2相關轉錄因子抗體 0.2ml
49017 Bcl rambo/Bcl 2 like 13 protein Bcl2樣凋亡蛋白13抗體 0.2ml
49018 Bcl G/BCL2 like 14 Bcl2樣凋亡蛋白14抗體 人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒 0.2ml
49019 BOK/Bcl 2 like protein 9 Bcl2樣凋亡蛋白9抗體 0.2ml
49020 Bmf/Bcl2 modifying factor Bcl2蛋白修飾因子抗體 0.2ml
49021 A4GALT/CD77 α1,4-半乳糖基轉移酶1 0.2ml
49022 Blood Group Antigen Precursor 血型抗原前體蛋白抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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