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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
49192 KIF20A/MKLP2 有絲分裂驅動蛋白樣2抗體 0.2ml
49193 TRIM25 雌激素反應鋅指蛋白抗體 0.2ml
49194 phospho-TRIM25(The91) 磷酸化雌激素反應指狀蛋白抗體 0.1ml
49195 TIP47/M6PRBP1 脂滴相關蛋白TIP47抗體 0.2ml
49196 TLS/FUS 粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體 0.2ml
49197 KIF2B 有絲分裂驅動蛋白樣2B抗體 0.2ml
49198 KLHL13 kelch樣蛋白13抗體 0.2ml
49199 phospho-TRIM25(Ser100) 磷酸化雌激素反應指狀蛋白抗體 0.1ml
49200 KLHL9 kelch樣蛋白9抗體 0.2ml
49201 MKKS/BBS6 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 0.2ml
49202 MSF/Cell division control protein septin D1 細胞周期調控蛋白D1抗體 0.2ml
49203 MyoGEF 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 0.2ml
49204 NAT10 乙酰基轉移酶10抗體 0.2ml
49205 NEK7 */*蛋白激酶Nek7抗體 0.2ml
49206 GGCX γ-谷氨酰羧化酶抗體 0.2ml
49207 Factor VII light chain *VII 0.2ml
49208 Myosin VIIa/DFNB2 肌球蛋白7a/常染色體隱性耳聾蛋白2抗體 0.2ml
49209 Factor X *10抗體 0.2ml
49210 NIR2 膜磷脂轉移蛋白1抗體 0.2ml
49211 NUSAP1 核仁和紡錘體相關蛋白1抗體 0.2ml
49212 RAB35 RAS相關蛋白癌基因Rab35抗體 0.2ml
49213 RACGAP1 Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體 0.2ml
49214 phospho-RACGAP1(Ser387) 磷酸化Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體 0.1ml
49215 RCC2 染色體濃縮調節蛋白2抗體 0.2ml
49216 SEPT1 細胞分化蛋白SEP1抗體 0.2ml
49217 SEPT10 細胞分化蛋白SEPT10抗體 0.2ml
49218 SEPT12 細胞分化蛋白SEPT12抗體 0.2ml
49219 SEPT14 細胞分化蛋白SEPT14抗體 0.2ml
49220 SPECC1L 細胞質和紡錘體機化蛋白A抗體 0.2ml
49221 Septin 3 神經元特異性蛋白3抗體 0.2ml
49222 UCHL5IP 泛素羧基末端水解酶5互相作用蛋白1抗體 0.2ml
49223 VPS4a 液泡分選蛋白4抗體 0.2ml
49224 APC5 細胞分裂周期蛋白5抗體 0.2ml
49225 BRD7 鼻咽癌相關轉錄調節蛋白抗體 0.2ml
49226 BRRN1/CAPH 染色體相關蛋白H抗體 0.2ml
49227 CDC123/C10orf7 細胞分裂周期蛋白CDC123抗體 0.2ml
49228 CCDC16/zinc finger protein 830 鋅指蛋白830抗體 0.2ml
49229 CDC20B 細胞分裂周期蛋白20B抗體 0.2ml
49230 ccnb1ip1 周期蛋白B1結合蛋白1抗體 0.2ml
49231 CDC45L 細胞分裂周期調控蛋白45抗體 0.2ml
49232 CDCA2 細胞分裂周期蛋白2抗體 0.2ml
49233 CEP152 中心體蛋白152抗體 0.2ml
49234 CEP76 中心體蛋白質76抗體 0.2ml
49235 CHMP1B 染色質修飾蛋白1B抗體 0.2ml
49236 CIRBP 冷誘導RNA結合蛋白抗體 0.2ml
49237 CKS2 細胞周期蛋白依賴性激酶調節亞基2抗體 0.2ml
49238 CLASP1 細胞連接相關蛋白1抗體 0.2ml
49239 CLASP2 細胞連接相關蛋白2抗體 0.2ml
49240 DIS3 有絲分裂控制蛋白dis3抗體 0.2ml
49241 DPEP3 膜二肽酶3抗體 0.2ml
49242 DSN1 著絲粒相關蛋白DSN1抗體 0.2ml
49243 DUSP13 雙特異性磷酸酶13抗體 0.2ml
49244 Flotillin 1 脂閥結構蛋白1抗體人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒 0.2ml
49245 GAJ/MND1 減數分裂核分裂蛋白1抗體 0.2ml
49246 GLP2R 胰高血糖素樣肽2受體抗體 0.2ml
49247 AMPK beta 1 腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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