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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人c-sis ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人c-sis ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人c-sis ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
50144 PDZK4 PDZ結構域PDZK4蛋白抗體 0.2ml
50145 PDZD5A/FRMPD2L2 PDZ結構域PDZK5A蛋白抗體 0.2ml
50146 PDZD6 PDZ結構域PDZK6蛋白抗體 0.2ml
50147 PDZD7 PDZ結構域PDZK7蛋白抗體 0.2ml
50148 PDZD8 PDZ結構域PDZK8蛋白抗體 0.2ml
50149 TRPM7 瞬時受體電位離子通道蛋白7抗體(M亞家族) 0.2ml
50150 TRPM8 “冷"蛋白TRPM8抗體 0.2ml
50151 TRPM3 瞬時受體電位離子通道蛋白3抗體(M亞家族) 0.2ml
50152 TRPM5 瞬時受體電位離子通道蛋白5抗體(M亞家族) 0.2ml
50153 TRPM6 瞬時受體電位離子通道蛋白6抗體(M亞家族) 0.2ml
50154 TRPM1 瞬時受體電位離子通道蛋白1抗體(M亞家族) 0.2ml
50155 TRPM4 瞬時受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族) 0.2ml
50156 DIS3L 有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體 0.2ml
50157 DIS3L2 有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體 0.2ml
50158 DOM3Z DOM3Z蛋白抗體 0.2ml
50159 DR1 protein 轉錄下調蛋白1抗體 0.2ml
50160 Dermokine beta Dermokine β蛋白抗體 0.2ml
50161 DPCR1 DPCR1蛋白抗體 0.2ml
50162 DHFR 二氫*還原酶抗體 0.2ml
50163 DVL2 蓬亂蛋白2抗體 0.2ml
50164 phospho-DVL2(Thr224) 磷酸化蓬亂蛋白2抗體 0.1ml
50165 ODZ3/Teneurin 3 固生蛋白3抗體 0.2ml
50166 ACCSL ACCSL蛋白抗體 0.2ml
50167 FAM135B FAM135B蛋白抗體 0.2ml
50168 FAM166A FAM166A蛋白抗體 0.2ml
50169 HIDE1/C19orfC38 19號染色體開放閱讀框38抗體 0.2ml
50170 HIG1/HIGD1A 缺氧誘導基因1蛋白抗體 0.2ml
50171 HIP1R/HIP12/HIP3 亨丁頓舞蹈癥相互作用蛋白12抗體 0.2ml
50172 HMBS/PBGD 卟膽原脫氨酶抗體 0.2ml
50173 HN1/ARM2 雄激素調節蛋白2抗體 0.2ml
50174 HN1L 雄激素調節樣蛋白抗體 0.2ml
50175 HORMAD2 異質核糖核蛋白U2樣蛋白抗體 0.2ml
50176 HRP2 肝癌衍生生長因子2抗體 0.2ml
50177 C22orf31 22號染色體開放閱讀框31抗體 0.2ml
50178 CDC37L1 細胞分裂周期37樣蛋白1抗體 0.2ml
50179 CDK5RAP1 CDK5激活結合蛋白1抗體 0.2ml
50180 CDK5RAP2 CDK5激活結合蛋白2抗體 0.2ml
50181 CINP CDK2相互作用蛋白抗體 0.2ml
50182 CDK14/PFTK1 周期蛋白依賴性激酶14抗體 0.2ml
50183 RGC32 補體應答基因32抗體 0.2ml
50184 CKI γ3 酪蛋白激酶1γ3抗體 0.2ml
50185 AKIRIN1 AKIRIN1蛋白抗體 0.2ml
50186 AKIRIN2 AKIRIN2蛋白抗體 0.2ml
50187 FBXW5 FBXW5蛋白抗體 0.2ml
50188 FBXW12/FBXO35 FBXW12蛋白抗體 0.2ml
50189 FBXO42 FBXO42蛋白抗體 0.2ml
50190 FBXO4 FBXO4蛋白抗體 0.2ml
50191 FBXO28 FBXO28蛋白抗體 0.2ml
50192 FBXO27 FBXO27蛋白抗體 0.2ml
50193 FBXO24 FBXO24蛋白抗體 0.2ml
50194 hnRNP A2B1 異質核糖核蛋白hnRNPA2抗體 0.2ml
50195 hnRNP U 異質核糖核蛋白U抗體 0.2ml
50196 AIM1L 黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體 0.2ml
50197 AHNAK2 AHNAK核蛋白2抗體 0.2ml
50198 AGXT2L2 AGXT2L2蛋白抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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