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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人c-jun ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人c-jun ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人c-jun ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
50200 ANKS1B/AIDA1 β淀粉樣蛋白胞內結構域相關蛋白1抗體 0.2ml
50201 ANKS3 錨蛋白重復及SAM結構域蛋白3抗體 0.2ml
50202 ANKS6 錨蛋白重復及SAM結構域蛋白6抗體 0.2ml
50203 ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體 0.2ml
50204 ARSH 芳香基硫酸酯酶H抗體 0.2ml
50205 ARSK 芳香基硫酸酯酶K抗體 0.2ml
50206 ART3 二磷酸腺苷核糖基轉移酶3抗體 0.2ml
50207 Tankyrase 端粒調控因子抗體 0.2ml
50208 ART5 二磷酸腺苷核糖基轉移酶5抗體 0.2ml
50209 ASB13 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族13抗體 0.2ml
50210 ASC2/POP1 感染性蛋白*蛋白1抗體 0.2ml
50211 ATAD3A/B/C 三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體 0.2ml
50212 MAP4K6/MINK1 絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體 0.1ml
50213 ATAD2 三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體 0.2ml
50214 ASMTL ASMTL蛋白抗體 0.2ml
50215 GPCR TAS1R3 G蛋白偶聯受體TAS1R3抗體 0.2ml
50216 BAGE2 腫瘤/睪丸抗原2.2抗體 0.2ml
50217 BAGE3 腫瘤/睪丸抗原2.3抗體 0.2ml
50218 BAGE4 腫瘤/睪丸抗原2.4抗體 0.2ml
50219 KMT1C/G9a 組蛋白H3賴氨酸9甲基化1C抗體 0.2ml
50220 COPS8 信號轉導蛋白亞基8抗體 0.2ml
50221 COPS6 信號轉導蛋白亞基6抗體 0.2ml
50222 FBXO21 F-box蛋白21抗體 0.2ml
50223 FBXO38 F-box蛋白38抗體 0.2ml
50224 COPS4 信號轉導蛋白亞基4抗體 0.2ml
50225 COPS7A 信號轉導蛋白亞基7A抗體 0.2ml
50226 COPS2/TRIP15 甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體 0.2ml
50227 GPS1/CSN1 G蛋白通路抑制蛋白1抗體 0.2ml
50228 Cullin 7 泛素連接酶CUL7蛋白抗體 0.2ml
50229 CDCA7 細胞分裂周期相關蛋白 0.2ml
50230 ASB12 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體 0.2ml
50231 ASB4 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族4抗體 0.2ml
50232 ASB9 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體 0.2ml
50233 ASB8 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體 0.2ml
50234 phospho-GPS1/CSN1(Ser474) 磷酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 0.1ml
50235 ASB7 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族7抗體 0.2ml
50236 ASB17 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族17抗體 0.2ml
50237 ASB5 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族5抗體 0.2ml
50238 ZSWIM2 E3泛素蛋白連接酶ZSWIM2抗體 0.2ml
50239 ZSWIM3 ZSWIM3蛋白抗體 0.2ml
50240 ZNRF1 鋅指/環指蛋白1抗體 0.2ml
50241 ZNRF2 鋅指/環指蛋白2抗體 0.2ml
50242 ZNRF3 鋅指蛋白3/環指蛋白3抗體 0.2ml
50243 ZNRF4 鋅指/環指蛋白4抗體 0.2ml
50244 ZNF230/RNF141 鋅指蛋白230抗體 0.2ml
50245 UBR2 泛素蛋白連接酶E3α2抗體 0.2ml
50246 UBOX5/RNF37 泛素結合酶7相互作用蛋白5抗體 0.2ml
50247 TTC33 TTC33蛋白抗體 0.2ml
50248 TTC3/RNF105 環指蛋白105抗體 0.2ml
50249 TRIM11/RNF92 環指蛋白92抗體 0.2ml
50250 TRIM35 TRIM35蛋白抗體 0.2ml
50251 TRIM41 環指蛋白調節蛋白激酶C蛋白抗體 0.2ml
50252 TRIM50 TRIM50蛋白抗體 0.2ml
50253 TRIM5α/RNF88 環指蛋白88抗體 0.2ml
50254 TRIAD3 鋅指蛋白抑制NFκB蛋白抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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