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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-17 05:07:41瀏覽次數(shù):237次
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人Smad1 ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人Smad1 ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人Smad1 ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
50370 phospho-IRF3(Ser386) 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體 0.1ml
50371 RNF187 環(huán)指蛋白187抗體 0.2ml
50372 PACRG 麻瘋病和帕金森氏病共同調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.2ml
50373 PJA2/RNF131 環(huán)指蛋白131抗體 0.2ml
50374 MUL1/RNF218 E3泛素連接酶MUL1抗體 0.2ml
50375 BNC1/Basonuclin 1 堿性核蛋白1/鋅指蛋白basonuclin抗體 0.2ml
50376 BNC2/Basonuclin 2 堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體 0.2ml
50377 BTBD1 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8)抗體 0.2ml
50378 ANKRD17 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 0.2ml
50379 ARHGAP32 Rho GTP酶激活蛋白32抗體 0.2ml
50380 ASTE1 ASTE1蛋白抗體 0.2ml
50381 BCL7B BCL7B蛋白抗體 0.2ml
50382 RMND5B RMND5B蛋白抗體 0.2ml
50383 NNP1/RRP1 like protein 新型核蛋白質(zhì)1抗體 0.2ml
50384 α-Adaptin 銜接蛋白α抗體 0.1ml
50385 SASS6 紡錘體組裝異常蛋白6抗體 0.2ml
50386 SPO11 減數(shù)分裂重組蛋白SPO11抗體 0.2ml
50387 STIL 中斷位點蛋白STIL抗體 0.2ml
50388 ARL8B ADP核糖基化樣因子8B抗體 0.2ml
50389 CENPO 著絲粒蛋白O抗體 0.2ml
50390 CEP128 中心體蛋白128抗體 0.2ml
50391 CP110 中心體蛋白110抗體 0.2ml
50392 KATNA1/Katanin p60 A1 劍蛋白p60亞基A1抗體 0.2ml
50393 ACTR1A (α/β-centractin) 肌動蛋白相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
50394 GPSM2 G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白2抗體 0.2ml
50395 HAUS4/C14orf94 14號染色體開放閱讀框94抗體 0.2ml
50396 DIP2A/C21orf106 21號染色體開放閱讀框106抗體 0.2ml
50397 MAP-9 微管相關(guān)蛋白9抗體 0.2ml
50398 MAP7D1/RPRC1 */*富含卷曲蛋白1抗體 0.2ml
50399 MKLP1 有絲分裂驅(qū)動蛋白樣1抗體 0.2ml
50400 NDE1 核分布基因E同源蛋白1抗體 0.2ml
50401 NEK9 */*蛋白激酶NEK9抗體 0.2ml
50402 phospho-NEK9(Thr210) 磷酸化*/*蛋白激酶NEK9抗體 0.1ml
50403 NNF1R/PMF1 多胺調(diào)控因子1抗體 0.2ml
50404 NYS48 NYS48蛋白抗體 0.2ml
50405 beta Adaptin/AP2 銜接蛋白β抗體 0.1ml
50406 PRPF4 PRPF4蛋白抗體 0.2ml
50407 RanBP1 RAN結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
50408 RanBP2 RAN結(jié)合蛋白2/核孔蛋白抗體 0.2ml
50409 ASZ1 錨定蛋白樣蛋白1抗體 0.2ml
50410 GDAP2 *誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
50411 LRCH1 富含*重復(fù)家庭蛋白1抗體 0.2ml
50412 LRCH2 富含*重復(fù)家庭蛋白2抗體 0.2ml
50413 LRCH3 富含*重復(fù)家庭蛋白3抗體 0.2ml
50414 LRCH4 富含*重復(fù)家庭蛋白4抗體 0.2ml
50415 Gamma-Adaptin/γ-Adaptin 銜接蛋白γ抗體 0.1ml
50416 NHLRC1 肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體 0.2ml
50417 NHLRC2 非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白2抗體 0.2ml
50418 NHLRC3 非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白3抗體 0.2ml
50419 RanBP3 RAN結(jié)合蛋白3抗體 0.2ml
50420 MARCH1 膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體 0.2ml
50421 MARCH2 膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體 0.2ml
50422 MARCH3 膜相關(guān)環(huán)指蛋白3抗體 0.2ml
50423 MARCH4 膜相關(guān)環(huán)指蛋白4抗體 0.2ml
50424 MARCH5 膜相關(guān)環(huán)指蛋白5抗體 0.2ml
50425 MARCH6 膜相關(guān)環(huán)指蛋白6抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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