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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
52375 Cullin 2 Cullin2抗體 0.2ml
52376 Connexin-31 間隙連接蛋白31抗體 0.1ml
52377 Connexin-32 間隙連接蛋白32抗體 0.1ml
52378 Connexin-36 間隙連接蛋白36抗體 0.1ml
52379 Connexin-37/GJA4 間隙連接蛋白37抗體 0.1ml
52380 Connexin-40 間隙連接蛋白40抗體 0.1ml
52381 MCPIP1 單核細胞趨化誘導蛋白1抗體 0.2ml
52382 LOXL4 賴氨酰氧化酶樣蛋白4抗體 0.2ml
52383 Connexin 43 間隙連接蛋白43抗體 0.1ml
52384 Phospho-Connexin 43(Ser368) 磷酸化Connexin 43蛋白抗體 0.1ml
52385 HAS1/Hyaluronan synthase 1 透明質酸合成酶1抗體 0.1ml
52386 Connexin-45 間隙連接蛋白45抗體 0.1ml
52387 CXCR1/IL-8RA 細胞表面趨化因子受體1抗體 0.1ml
52388 SRPK1 */*蛋白激酶SRPK1抗體 0.2ml
52389 CXCR2/CD182 細胞表面趨化因子受體2抗體 0.1ml
52390 BNIP3L 促凋亡BNIP3L蛋白抗體 0.2ml
52391 CX3CL1 CX3CL1抗體 0.2ml
52392 CX3CR1 趨化因子受體1抗體 0.2ml
52393 BAG5 BCL2分子伴侶調節蛋白5抗體 0.2ml
52394 CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體 0.2ml
52395 CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體 0.2ml
52396 DLC1/DLC8 胞漿動力蛋白輕鏈1抗體 0.2ml
52397 Cyclin A2/CCN1 周期素A2抗體 0.2ml
52398 Cyclin A1 周期素A1蛋白抗體 0.2ml
52399 Cyclin B1 周期素B1抗體 0.1ml
52400 NAIP 神經細胞凋亡抑制蛋白抗體 0.2ml
52401 Phospho-Cyclin B1(Ser147) 磷酸化周期素B1抗體 0.1ml
52402 Phospho-Cyclin B1(Ser133) 磷酸化周期素B1抗體 0.1ml
52403 Phospho-Cyclin B1(Ser126) 磷酸化周期素B1抗體 0.1ml
52404 RIPK-1/RIP **激酶1受體相互作用蛋白抗體 0.1ml
52405 Cyclin C 周期素C抗體 0.1ml
52406 Cyclin D1/FSTL3 周期素D1抗體 0.1ml
52407 ELMO1 吞噬細胞運動蛋白1抗體 0.2ml
52408 Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 磷酸化cyclin D1抗體 0.1ml
52409 CDO1 半*雙加氧酶1抗體 0.2ml
52410 Lactoferrin 乳鐵蛋白抗體 0.1ml
52411 NUAK2 SNF1/AMP激酶相關激酶2抗體 0.2ml
52412 Cyclin D2 周期素D2抗體 0.1ml
52413 Cyclin D3 周期素D3抗體 0.1ml
52414 Cyclin E 周期素E抗體 0.1ml
52415 PHLP 腫瘤抑制基因PHLPP抗體 0.2ml
52416 phospho-Cyclin E(Thr395) 磷酸化周期素E抗體 0.1ml
52417 phospho-Cyclin E(Thr62) 磷酸化周期素E抗體 0.1ml
52418 Cyclin E2 周期素E2抗體 0.2ml
52419 Cyclin F 周期素F抗體 0.1ml
52420 Cyclin G 周期素G抗體 0.1ml
52421 Cyclin G2 周期素G2抗體 0.1ml
52422 Cyclin H 周期素H抗體 0.2ml
52423 Cystatin A 胱抑素A/半*蛋白酶抑制劑A抗體 0.2ml
52424 Cystatin C/CST3 胱抑素C/半*蛋白酶抑制劑C抗體 0.2ml
52425 Cystatin B 胱抑素B/半*蛋白酶抑制劑B抗體 0.2ml
52426 PRODH 人肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒*脫氫酶抗體 0.2ml
52427 RAIDD CASP2凋亡相關蛋白抗體 0.1ml
52428 Cytoglobin 細胞球蛋白抗體 0.1ml
52429 CYLD 微管結合蛋白CYLD抗體 0.1ml
52430 phospho-CYLD(Ser418) 磷酸化微管結合蛋白CYLD抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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