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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人*轉氨酶/谷丙轉氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人*轉氨酶/谷丙轉氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*轉氨酶/谷丙轉氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
52890 FASN/Fatty Acid Synthase 1 脂肪酸合成酶抗體 0.1ml
52891 APOA2 載脂蛋白A2抗體 0.1ml
52892 ApoA4 載脂蛋白A4抗體 0.1ml
52893 FAST kinase Fas活化的絲/*激酶抗體 0.1ml
52894 APOC2 載脂蛋白C2抗體 0.1ml
52895 APOC3 載脂蛋白C3抗體 0.2ml
52896 APOA4 載脂蛋白A4抗體 0.2ml
52897 APOA5 載脂蛋白A5抗體 0.2ml
52898 BASC4 乳腺癌擴增序列蛋白4抗體 0.2ml
52899 CASC5 腫瘤易感性候選基因5抗體 0.2ml
52900 FasL/CD178 兔抗FasL抗體。 0.1ml
52901 fatty acid elongase 脂肪酸延長酶抗體 1ml
52902 Fc γ RII a/CD32 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體 0.1ml
52903 Fc γ RII a/CD32 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體 0.1ml
52904 phospho-CD32B(Tyr291) 磷酸化CD32B抗體 0.1ml
52905 Centaurin γ1 中心體肌動蛋白γ1抗體(增強型PI3K蛋白) 0.2ml
52906 FBN1 原纖維蛋白1抗體 0.2ml
52907 FBP1 果糖1,6-二磷酸酯酶抗體 0.2ml
52908 FBP2 肌肉果糖二磷酸酶抗體 0.1ml
52909 FDC-SP/ADC 濾泡樹突細胞分泌蛋白抗體 0.1ml
52910 DCUN1D2 DCN1樣蛋白2抗體 0.2ml
52911 APBB1/Fe65 protein 鐵蛋白Fe65抗體 0.1ml
52912 phospho-APBB1 (Ser175) 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 0.1ml
52913 phospho-APBB1 (Ser347) 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 0.1ml
52914 Fumarate hydratase/FH 富馬酸水合酶抗體 0.2ml
52915 FGF1/AFGF 酸性成纖維細胞生長因子抗體 0.1ml
52916 GCET1 B淋巴細胞生發中心相關蛋白抗體 0.2ml
52917 FGF3/Oncogene INT2 纖維母細胞生長因子3抗體 0.1ml
52918 FGF4 纖維母細胞生長因子4抗體 0.1ml
52919 FGF5 纖維母細胞生長因子5抗體 0.1ml
52920 FGF6 纖維母細胞生長因子6抗體 0.1ml
52921 KCNK TWIK相關酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體 0.2ml
52922 KDM4C/GASC1/JMJD2C 鱗狀細胞癌增強蛋白1抗體 0.1ml
52923 KGF/FGF7 纖維母細胞生長因子7抗體 0.1ml
52924 FGF8/HBGF-8 成纖維細胞生長因子8抗體 0.1ml
52925 KLHL7 kelch樣蛋白7抗體 0.2ml
52926 FGF10 成纖維細胞生長因子10抗體 0.1ml
52927 FGF13 纖維母細胞生長因子13抗體 0.2ml
52928 FGF16 成纖維細胞生長因子16抗體 0.2ml
52929 FGF17 成纖維細胞生長因子17抗體 0.2ml
52930 FGF19 成纖維細胞生長因子19抗體 0.2ml
52931 FGF20 成纖維細胞生長因子20抗體 0.2ml
52932 FGFBP 纖維細胞生長因子結合蛋白抗體 0.1ml
52933 FGF22 成纖維細胞生長因子22抗體 0.2ml
52934 FGF21 成纖維細胞生長因子21抗體 0.1ml
52935 bFGFR/FGFR1 堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 0.1ml
52936 DAT1/LIM domain only 3 神經細胞特異性轉錄因子DAT1抗體 0.2ml
52937 Phospho-FGFR1(Tyr653/654) 磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 0.1ml
52938 Phospho-FGFR1 (Tyr766) 磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 0.1ml
52939 Phospho-FGFR1 (Tyr307) 磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 0.1ml
52940 Phospho-FGFR1+FGFR2 (Tyr463) 磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 0.1ml
52941 MOS 原癌基因*/*蛋白激酶MOS抗體 0.2ml
52942 FGFR2/CD332 人*轉氨酶/谷丙轉氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒成纖維細胞生長因子受體2抗體 0.1ml
52943 FGFR3/CD333 成纖維細胞生長因子受體3抗體 0.1ml
52944 FGFR4/CD334 成纖維細胞生長因子受體4抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*轉氨酶/谷丙轉氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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