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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
53115 SIRT7 沉默調節樣蛋白SirT7抗體 0.2ml
53116 Gelsolin 凝溶膠蛋白抗體 0.1ml
53117 BPI 殺菌/通透性增強蛋白抗體 0.2ml
53118 GFAP 膠質纖維酸性蛋白抗體 0.1ml
53119 phospho-GFAP (Ser8) 磷酸化膠質纖維酸性蛋白抗體 0.1ml
53120 SMYD2 組蛋白甲基轉移酶SMYD2抗體 0.2ml
53121 SMYD3 組蛋白甲基轉移酶SMYD3抗體 0.2ml
53122 SMYD4 組蛋白甲基轉移酶SMYD4抗體 0.2ml
53123 SSX8 滑膜肉瘤X斷點蛋白8抗體 0.1ml
53124 GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體) 0.1ml
53125 GFP 綠色熒光蛋白抗體 0.1ml
53126 GFP 綠色熒光蛋白抗體 0.2ml
53127 EGFP 重組增強型綠色熒光蛋白抗體 0.1ml
53128 c-Maf 原癌基因cMAF抗體 0.1ml
53129 c-Maf 原癌基因cMAF抗體 0.2ml
53130 c-Myb 轉錄激活因子MYB抗體 0.2ml
53131 GFRA4 GDNF家族受體α-4抗體 0.2ml
53132 GFR Alpha-1 GDNF家族受體α-1抗體 0.1ml
53133 GHR 生長激素受體抗體 0.1ml
53134 l-Myc Myc基因肺癌相關蛋白抗體 0.1ml
53135 Frizzled 5 Wnt信號受體蛋白抗體 0.2ml
53136 Ghrelin/Obestatin 腦腸肽抗體 0.1ml
53137 AARE 氧化蛋白質水解酶 0.2ml
53138 ABI2 腫瘤抑制基因ABI2/**蛋白激酶結合蛋白抗體 0.2ml
53139 GHRF/GHRH 生長激素釋放激素抗體 0.1ml
53140 ID1 DNA結合抑制因子1抗體 0.1ml
53141 GIG8/ID2 DNA結合抑制因子2抗體 0.1ml
53142 ABI3 ABI基因家族2抗體 0.2ml
53143 GIP 胃泌素抑制肽抗體 0.2ml
53144 TNFRSF18/GITR 糖皮質激素誘導腫瘤壞死因子受體抗體 0.2ml
53145 AIM2 干擾素誘導蛋白AIM2抗體 0.1ml
53146 TNFRSF19 腫瘤壞死因子配體超家族成員19抗體 0.1ml
53147 Cobra poison Protein 眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 0.2ml
53148 ARL11 ADP核糖基化因子樣11抗體 0.2ml
53149 GLO1 乙二醛酶1抗體 0.1ml
53150 ARMCX1 ARM重復X連鎖蛋白ARMCX1抗體 0.2ml
53151 BARD1 乳腺癌易感基因環狀結構域蛋白抗體 0.1ml
53152 GLP-1 (7-36) 胰高血糖素樣肽-1抗體 0.1ml
53153 GLP-1 胰高血糖素樣肽-1抗體 0.1ml
53154 ARMCX2 ARM重復X連鎖蛋白ARMCX2抗體 0.2ml
53155 GLP-1(1G9) GLP-1單克隆抗體 0.1ml
53156 GRPP 胰高血糖素相關肽抗體 0.2ml
53157 GRPP 胰高血糖素相關肽抗體 0.1ml
53158 ARMCX3 ARM重復X連鎖蛋白ARMCX3抗體 0.2ml
53159 GLP-1R 胰高血糖素樣肽-1受體抗體 0.1ml
53160 Glucagon 胰高血糖素抗體 0.1ml
53161 Glucagon Receptor 胰高血糖素受體抗體 0.1ml
53162 BRCAA1/RBBP1L1 乳腺癌相關抗原BRCAA1抗體 0.2ml
53163 HBEX2/Bex1 腦組織表達X連鎖蛋白1抗體 0.2ml
53164 GLP-2 胰高血糖素樣肽-2抗體 0.1ml
53165 GLP-2 胰高血糖素樣肽-2抗體 0.1ml
53166 BCSC1 人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒 乳腺癌抑癌蛋白抗體 0.2ml
53167 GLUT1 葡萄糖轉運蛋白1抗體 0.1ml
53168 GLUT2 葡萄糖轉運蛋白2抗體 0.1ml
53169 GLUT3 葡萄糖轉運蛋白3抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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