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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-24 20:04:45瀏覽次數(shù):102次
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人*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
53443 MHC class I 組織相容性復(fù)合體1多肽抗體 0.1ml
53444 MHC Class II/MRC OX-6 組織相容性復(fù)合體2抗體 0.1ml
53445 HLA DMβ 組織相容性復(fù)合體β抗體 0.1ml
53446 HLA-DR HLA-DR抗體 0.2ml
53447 HLA B/HLA G 人類白細(xì)胞抗原G抗體 0.1ml
53448 HLA E 人類白細(xì)胞抗原E抗體 0.2ml
53449 HMGA1/HMG-I/HMG-Y 高遷移率族蛋白A1抗體 0.2ml
53450 HMGA2 高遷移率族蛋白A2抗體 0.1ml
53451 HMGB1 高遷移率族蛋白B1抗體 0.1ml
53452 HMGB4 高遷移率族蛋白B4抗體 0.1ml
53453 HMGCL 三羥基*基*裂解酶抗體 0.2ml
53454 HMGCR 三羥基*基*還原酶抗體 0.2ml
53455 phospho-HMGCR(Ser872) 磷酸化三羥基*基*還原酶抗體 0.1ml
53456 HMGCS1 三羥基*基*合成酶1 0.2ml
53457 HMGCS2 三羥基*基*合成酶2抗體 0.2ml
53458 HNF1/TCF1/HNF1A 肝細(xì)胞核因子1α抗體 0.2ml
53459 HNF4/TCF4/HNF4A 肝細(xì)胞核因子4α抗體 0.1ml
53460 phospho-HNF4 (Ser313) 磷酸化肝細(xì)胞核因子4α抗體 0.1ml
53461 HO-1 血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體 0.1ml
53462 Heme Oxygenase 1/HO-1 血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體 0.1ml
53463 HO-2 血紅素氧合酶2抗體 0.1ml
53464 HOXB4 HOXB4抗體 0.1ml
53465 HOXc8 HOXc8抗體 0.1ml
53466 PSGD/HOXB13 同源盒蛋白HOXB13抗體 0.2ml
53467 Heparanase 乙酰肝素酶抗體 0.1ml
53468 phospho-HP1 alpha (Tyr24) 磷酸化異染色質(zhì)蛋白1抗體(果蠅) 1ml
53469 HOXA10 HOXA10抗體 0.1ml
53470 Phospho-HP1(Tyr43) 異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體(果蠅) 1ml
53471 HPCL2 植烷酰*羥化酶2抗體 0.2ml
53472 HPL/PL 人胎盤泌乳素抗體 0.1ml
53473 Nuclear Matrix Protein p84/NMP84 核基質(zhì)p84蛋白抗體 0.2ml
53474 HPV16-E6 人類乳頭狀瘤病毒16抗體 0.1ml
53475 HPV18 E6 人類乳頭狀瘤病毒18 E6抗體 0.2ml
53476 HPV18 E6 monoclonal 人類乳頭狀瘤病毒18 E6單克隆抗體 0.2ml
53477 HPV16 E6 + HPV18 E6 人類乳頭狀瘤病毒16/18 E6抗體 0.2ml
53478 HPV16-E7 人類乳頭狀瘤病毒16-E7抗體 0.2ml
53479 rHPV 重組人乳頭瘤病毒抗體 0.2ml
53480 HPV16-E7 人類乳頭狀瘤病毒16-E7抗體 0.2ml
53481 Hpt/Haptoglobin 結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體 0.1ml
53482 HRAS/Ras/Ras p21 原癌基因H-ras抗體 0.1ml
53483 HRAS+KRAS 轉(zhuǎn)化蛋白p21抗體(原癌基因H-ras抗體) 0.2ml
53484 HRG-alpha/Neuregulin 1 Heregulin α蛋白抗體 0.1ml
53485 albumin/AFM 人血清白蛋白抗體 0.2ml
53486 Albumin(3F4) 人血清白蛋白單克隆抗體 0.1ml
53487 HRG Beta1 Heregulin β蛋白抗體 0.1ml
53488 HRH3/GPCR97 組織胺H3受體抗體 0.1ml
53489 HSF1 熱休克因子1抗體 0.1ml
53490 phospho-HSF1(Ser326) 磷酸化熱休克因子1抗體 0.1ml
53491 phospho-HSF1(Ser303) 磷酸化熱休克因子1抗體 0.2ml
53492 HRH4/GPCR105 組織胺H4受體抗體 0.1ml
53493 phospho-HSF1(Ser307) 磷酸化熱休克因子1抗體 0.1ml
53494 HSTF2/HSF2 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體 0.1ml
53495 HSL/LIPE 荷爾蒙敏感脂肪酶抗體人*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒 0.1ml
53496 Phospho-HSL (Ser959+960) 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 0.1ml
53497 Phospho-HSL (Ser863) 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 0.1ml
53498 Phospho-HSL (Ser865) 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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