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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-06 09:07:22瀏覽次數(shù):183次
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人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
57376 Anti-HEV 戊型肝炎病毒抗體 0.1ml
57377 Anti-HGF 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體 0.1ml
57378 Anti-HGV 庚型肝炎病毒抗體 0.2ml
57379 Anti-HHV4/EBV 人類皰疹病毒4抗體 0.2ml
57380 Anti-HHV8/ORF K2/vIL-6 人類皰疹病毒8抗體 0.1ml
57381 Anti-HIF-1α 缺氧誘導(dǎo)因子1α 抗體 0.1ml
57382 Anti-Histone H3 抗組蛋白抗體 0.1ml
57383 Anti-Histone H3-like protein 抗組蛋白H3樣抗體 1ml
57384 Anti-HisX6/6His/His tag 聚*抗體/抗His tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
57385 anti-DYKDDDDK Tag /Flag-Tag polyclonal antibody 抗標(biāo)簽DYKDDDDK Tag抗體 0.2ml
57386 Anti-HIV gp120 艾滋病病毒抗體 0.2ml
57387 Anti-HIV-1 艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型抗體 0.1ml
57388 Anti-HLA-DR HLA-DR抗原抗體 0.1ml
57389 Anti-HLA-G 人類白細(xì)胞抗原G/組織相容性白細(xì)胞抗原G抗體 0.1ml
57390 Anti-HLA-E 人類白細(xì)胞抗原E 0.1ml
57391 Anti-HMGA1 高遷移率族蛋白A1抗體 0.2ml
57392 Anti-HMGA2 高遷移率族蛋白A2抗體 0.2ml
57393 Anti-HMGB1 高遷移率族蛋白-1抗體 0.1ml
57394 Anti-HO-1/HSP32 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗體 0.1ml
57395 Anti-HO-2 血紅素氧合酶-2抗體 0.1ml
57396 Anti-HOXc8 同源盒基因的一種 0.2ml
57397 Anti-HPV 人類乳頭狀瘤病毒抗體 0.1ml
57398 Anti-H-ras 原癌基因H-ras抗體 0.1ml
57399 Anti-HSL 荷爾蒙敏感脂肪酸抗體 0.2ml
57400 Anti-HSP-27 熱休克蛋白-27抗體 0.1ml
57401 Anti-HSP-60 熱休克蛋白-60抗體 0.1ml
57402 Anti-HSP-70 熱休克蛋白-70抗體 0.1ml
57403 Anti-HSP-90α 熱休克蛋白90α抗體 0.1ml
57404 Anti-HSP-90β 熱休克蛋白-90β 抗體 0.1ml
57405 anti-HtrA2/Omi *蛋白酶/線粒體*蛋白酶抗體 0.2ml
57406 Anti-hTRT omerase catalytic subunit 端粒酶抗體 0.1ml
57407 Anti-Human serumAnti-Human serum 兔抗人血清抗體抗血清 1ml
57408 Anti-Hypothetical protein hypothetical protein抗體 0.2ml
57409 anti-IAA 吲哚-3-乙酸抗體/植物生長(zhǎng)素抗體 0.1ml
57410 anti-IAP-5 凋亡抑制因子5抗體 0.2ml
57411 Anti-IASPP 腫瘤細(xì)胞凋亡ASPP家族的另一個(gè)成員抗體 0.1ml
57412 Anti-ICAD Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑 0.2ml
57413 Anti-IDE 胰島素降解酶抗體 0.1ml
57414 Mouse Anti-influenza A virus nucleoprotein Monoclonal 鼠抗人A核蛋白單克隆抗體 0.1ml
57415 Mouse Anti-influenza B virus nucleoprotein Monoclonal 鼠抗人禽B核蛋白單克隆抗體 0.1ml
57416 Anti-IFABP 小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
57417 Anti-IFITM1 干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體 0.2ml
57418 Anti-IFN-β Anti-human 干擾素-β抗體 0.1ml
57419 Anti-IFN-γ 鼠抗人干擾素-γ/IFN-gamma單克隆抗體 0.1ml
57420 Anti-IFN-γAnti-Human 干擾素-γ抗體 0.1ml
57421 Anti-IFN-γAnti-mouse、rat 干擾素-γ抗體 0.1ml
57422 Anti-IGC 兔抗非洲爪蟾IGC抗體 1ml
57423 Anti-IGF-1 R 胰島素樣生長(zhǎng)因子-I受體抗體 0.1ml
57424 Anti-IGFBP-2 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2抗體 0.2ml
57425 Anti-IGFBP-5/IBP5 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-5抗體 0.1ml
57426 Anti-IGF-I 胰島素樣生長(zhǎng)因子-I抗體 0.1ml
57427 Anti-IGF-II 胰島素樣生長(zhǎng)因子-II抗體 0.1ml
57428 IGF-IIBP3 胰島素樣生長(zhǎng)因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體 0.2ml
57429 Anti-IKB β KB抑制蛋白抗體 0.2ml
57430 Anti-IKB α KB抑制蛋白α抗體 0.2ml
57431 Anti-IKI3 family protein 擬南芥IKI3抗體 0.2ml
57432 Anti-IL-10 人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒白介素10抗體 0.1ml
57433 anti-IL-12 白介素12抗體 0.1ml
57434 Anti-IL-13 白介素13抗體 0.1ml
57435 anti-IL-16/LCF 白細(xì)胞介素-16抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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