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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人β乳糖蛋白抗體IgG ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人β乳糖蛋白抗體IgG ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人β乳糖蛋白抗體IgG ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
58260 胰胨大豆瓊脂斜面(TSA) Tryptic Soy Agar 250 培養副溶血性弧菌,做細胞色素氧化酶實驗(SN標準)
58261 42℃生長培養基 42℃growth Medium 250 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗
58262 O/F培養基(HLGB) O/F Medium 250 用于鑒別弧菌葡萄糖代謝類型(發酵型或氧化型)(SN標準)
58263 氯化鈉結晶紫增菌液 Sodium Chloride Violet purple Enrichment Broth 250 用于副溶血性弧菌的選擇性增菌培養(GB標準)
58264 氯化鈉蔗糖瓊脂 Sodium Chloride Sucrose Agar 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(GB標準)
58265 嗜鹽菌選擇性瓊脂 Halophilic Bacteria Selective Agar 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(GB標準)
58266 氯化鈉血瓊脂基礎 Sodium Chloride Blood Agar Base 250 用于副溶血性弧菌的溶血試驗
58267 霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA) 250 用于霍亂弧菌的生化試驗(SN標準)
58268 T1N1 瓊脂 T1N1 Agar 250 用于霍亂弧菌的培養(SN標準)
58269 T1N0 肉湯 T1N0 Broth 250 用于霍亂弧菌的生長試驗(SN標準)
58270 T1N3 肉湯 T1N3 Broth 250 用于霍亂弧菌的生長試驗(SN標準)
58271 *葡萄糖斜面瓊脂 Arginine Dextrose Agar 100 用于霍亂弧菌的復合生化試驗(SN標準)
58272 mCPC 培養基 mCPC Medium 250 用于弧菌分離培養(FDA標準)
58273 mCPC培養基添加劑 mCPC Medium Supplement 1ml*5 每瓶添加于100ml mCPC培養基中
58274 副溶血性弧菌瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養
58275 副溶血性弧菌增菌液 250 用于副溶血性弧菌的增菌培養
58276 察氏瓊脂 Czapek Dox Agar 250 用于青霉、曲霉鑒定及保存菌種用
58277 產毒培養基 Toxin-Producing Medium 250 用于青霉、曲霉的產毒培養
58278 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA) Potato Dextrose Agar 250 用于霉菌、酵母菌計數(GB標準)
58279 高鹽察氏瓊脂 Salt Czapek Dox Agar 250 用于霉菌和酵母菌的計數(GB標準)
58280 沙氏瓊脂培養基 Sabouraud’s Agar 250 用于真菌檢測(GB標準)
58281 玉米粉瓊脂 Corn Meat Medium 250 用于真菌培養
58282 孟加拉紅培養基 Rose Bengal Medium 250 用于食品中霉菌及酵母菌總數測定
58283 酵母粉葡萄糖*瓊脂 Yeast Extract Dextrose Chloramphenicol Agar 250 用于食品中霉菌及酵母菌總數測定
58284 Candida Elective 瓊脂 Candida Elective Agar to Nickerson 250 用于食品中Candida及酵母菌總數測定(Merck方法)
58285 DTM培養基 DTM Medium 250 用于食品中真菌的培養(Merck方法)
58286 DRBC瓊脂 DRBC Agar 250 用于食品中霉菌及酵母菌分離培養
58287 WORT 瓊脂 Wort Agar 250 用于真菌,特別是酵母菌的計數和增菌培養(Merck方法)
58288 WORT 肉湯 Wort Broth 250 用于真菌,特別是酵母菌的培養(Merck方法)
58289 YGC瓊脂 YGC Agar 250 用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分離培養(ISO方法)
58290 改良綠色酵母菌和真菌肉湯 m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH 250 用于飲料中真菌及酵母菌檢測(Acumedia方法)
58291 Littman 瓊脂 Littman Agar 250 用于真菌的分離培養(Acumedia方法)
58292 DG-18瓊脂 DICHLORANGLYCEROL (DG-18) AGAR 250 用于食品中霉菌和酵母菌分離培養(Acumedia方法)
58293 YM瓊脂 YM Agar 250 用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分離培養(Acumedia方法)
58294 YM11瓊脂 YM11 Agar 250 濾膜法用于霉菌、酵母菌的分離培養(NEOGEN方法)
58295 OGY瓊脂 OGY Agar 250 用于霉菌和酵母菌分離培養和計數(Merck方法)
58296 WL營養瓊脂 WL Nutrient Agar 250 用于啤酒和發酵產品中酵母菌和細菌的計數
58297 改良沙氏瓊脂培養基 Sabouraud’s Agar,Modified 250 用于真菌檢測
58298 沙氏BHI瓊脂 Sabouraud BHI Agar 250 用于真菌檢測(Acumedia 方法)
58299 菌種培養基 Strain Medium(for B.Cereus) 250 用于四環素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(SN標準)
58300 四環素檢定瓊脂 Tetracyline Examination Agar 250 用于四環素殘留的微生物學檢定(SN標準)
58301 葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 Glucose Tryptone Agar 250 用于嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數、平酸芽孢和厭氧芽孢)分離培養(SN標準)
58302 布氏瓊脂 Brucella Agar 250 用于彎曲桿菌分離(SN標準)
58303 布氏肉湯 Brucella Broth 250 用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂制備(SN標準)
58304 改良Skirrow氏瓊脂基礎 Skirrow Agar Base,Modified 250 用于空腸彎曲菌的分離培養(SN 、GB標準)
58305 改良Camp-BAP氏瓊脂基礎 Camp-BAP Agar Base,Modified 250 用于彎曲桿菌選擇性分離培養(GB標準)
58306 TTC 瓊脂基礎 TTC Agar Base 250 用于彎曲桿菌的TTC試驗(GB標準)
58307 *培養基 Glycine Medium 250 用于彎曲桿菌*耐受性試驗(GB標準)
58308 快速硫化氫試驗瓊脂 H2S Test Medium 250 用于彎曲桿菌的硫化氫試驗(GB標準)
58309 DNA酶甲基綠瓊脂基礎 Dnase Agar Base with Methyl Green 100 用于彎曲桿菌的DNA酶水解試驗(GB標準)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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