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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
58462 XLD 瓊脂 Xylose Lysine Desoxycholate Agar 250 選擇性培養(yǎng)基,用于志賀氏菌的選擇性培養(yǎng)(FDA標(biāo)準(zhǔn))
58463 MH 肉湯(MHB) Mueller-Hinton Broth 250 用于抗生素敏感試驗(yàn)
58464 MH 瓊脂(MHA) Mueller-Hinton Agar 250 用于抗生素敏感試驗(yàn)
58465 中國(guó)藍(lán)瓊脂 China Blue Agar 250 弱選擇性培養(yǎng)基,用于腸道致病菌的選擇性分離
58466 克氏雙糖鐵瓊脂 Kligler Iron Agar 250 用于細(xì)菌復(fù)合生化試驗(yàn)(葡萄糖,乳糖)
58467 血瓊脂基礎(chǔ)2號(hào) Blood Agar Base N0.2 250 供分離營(yíng)養(yǎng)要求非常高的致病菌用,后加血液制成血平板
58468 血液瓊脂基礎(chǔ) Blood Agar Base 250 供分離營(yíng)養(yǎng)要求較高的致病菌用,后加血液制成血平板
58469 血液* Blood Enrichment Medium 250 用于從血液中分離病原菌
58470 氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基 TTC-Sabourand’s Medium 250 用于分離真菌,酵母菌等
58471 麥康凱瓊脂 Maconkey Agar 250 用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)
58472 麥康凱瓊脂(不含鹽) Maconkey Agar(without salt) 250 用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)
58473 麥康凱瓊脂2號(hào) Maconkey Agar No.2 250 用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)
58474 麥康凱瓊脂3號(hào) Maconkey Agar No.3 250 用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)
58475 堿性瓊脂平板 Alkaline Agar 250 用于分離霍亂弧菌
58476 堿性膽鹽瓊脂 Alkaline Bile Salt Agar 250 用于分離霍亂弧菌
58477 胰膘肉湯基礎(chǔ) Tryptose Broth Base 100 用于肺炎鏈球菌、布魯氏菌屬細(xì)菌的培養(yǎng)
58478 豆粉瓊脂(血瓊脂基礎(chǔ)) Blood Agar Base 250 用于配制血瓊脂、巧克力瓊脂及亞碲酸鹽瓊脂
58479 細(xì)菌L型增菌液 65 用于L型細(xì)菌增菌培養(yǎng)
58480 細(xì)菌L型分離瓊脂 110 用于L型細(xì)菌分離培養(yǎng)
58481 溶血瓊脂基礎(chǔ) 250 用于鼠疫桿菌培養(yǎng)
58482 龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ) 250 用于鼠疫桿菌的選擇性培養(yǎng)
58483 改良羅氏培養(yǎng)基基礎(chǔ) L-G medium Base,modified 250 用于結(jié)核桿菌的培養(yǎng)、計(jì)數(shù)、保存、照光試驗(yàn)、藥物敏感性測(cè)定及菌型鑒定等
58484 酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ) Acid L-G medium Base 250 適用于堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本
58485 堿性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ) Alkaline L-G medium Base 250 適用于酸性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本
58486 TCH(噻吩-2-羧酸酰肼) 0.1 加入改良羅氏培養(yǎng)基中制成TCH培養(yǎng)基,用于分枝桿菌鑒定
58487 戊烷脒*瓊脂基礎(chǔ) 250 用于炭疽桿菌的培養(yǎng)及初步鑒定
58488 *瓊脂基礎(chǔ) 250 用于炭疽桿菌的莢膜培養(yǎng)
58489 指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于炭疽桿菌的分離鑒別
58490 PLET 瓊脂基礎(chǔ) PLET Agar Base 250 用于炭疽桿菌的分離鑒別
58491 戊烷脒 50mg 加入戊烷脒多粘菌素瓊脂
58492 炭疽桿菌疫苗 50人份/5支 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58493 炭疽桿菌沉淀血清 1ml 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58494 炭疽桿菌噬菌體 1ml 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58495 炭疽桿菌診斷抗原 1ml 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58496 *敏感紙片 20片 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58497 印度墨汁 50ml 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58498 碘伏(液體) 500g 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58499 * 2000萬(wàn)單位/g 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58500 美藍(lán)(亞甲基藍(lán)) 25g 炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑
58501 水楊素 1g 進(jìn)口分裝,與HB116配套使用
58502 MiddleBrook 7H10 瓊脂 MiddleBrook 7H10 Agar 250 用于分枝桿菌的分離培養(yǎng)
58503 MiddleBrook 7H11 瓊脂 MiddleBrook 7H11 Agar 250 用于分枝桿菌的分離培養(yǎng)
58504 氣單胞菌鑒別瓊脂 Aeromonas Differential Agar 250 用于分離培養(yǎng)和鑒別氣單胞菌
58505 *肉湯 Arginine Broth acc. To Schubert 250 用于游泳池中假單胞菌檢測(cè)(Merck方法)
58506 人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒曲霉素瓊脂基礎(chǔ)(AFPA) 250 用于曲霉菌分離培養(yǎng)
58507 假單胞分離瓊脂 Pseudomonas Isolation Agar 250 用于假單胞菌群的測(cè)定
58508 假單胞分離肉湯 Pseudomonas Isolation Broth 250 用于假單胞菌群增菌培養(yǎng)
58509 肌醇測(cè)定培養(yǎng)基 Inositol Assay Broth 250 用于嬰幼兒配方食品和乳粉中肌醇測(cè)定
58510 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 Bromcresol Purple Dextrose Broth 250 用于低酸性罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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