人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。
59438 異綠原酸C Isochlorogenic acid C(4,5') ≥97%
59439 4,5-二咖啡酰奎寧酸 Isochlorogenic acid C(4,5') ≥97%
59440 異麥角甾苷 Isoacteoside ≥98%
59441 異木香內(nèi)脂 isoalantolactone ≥98%
59442 異嗪皮啶 Isofraxidin ≥98%
59443 異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷 Isorhamnetin-3-O-neohesperidoside ≥98%
59444 異* Isosilybin (A+B) mixture ≥98%
59445 異香蘭素 Isovanillin ≥98%
59446 茵陳色原酮 Capillarisin ≥98%
59447 茵芋苷 Skimmin ≥98%
59448 淫羊藿次苷Ⅱ Icarisid Ⅱ 95%
59449 銀鍛苷 Tiliroside 97%
59450 銀杏酸(C13:0) Ginkgolic Acid (C13:0) ≥98%
59451 銀杏酸(C17:1) Ginkgolic Acid (C17:1) ≥99%
59452 吲哚醇 Indolol ≥98%
59453 隱綠原酸 4-Dicaffeoylquinic Acid ≥97%
59454 4-咖啡酰奎寧酸 4-Dicaffeoylquinic Acid ≥97%
59455 柚皮甙二氫查爾酮 Naringin dihydrochalcone ≥98%
59456 右旋比靈堿 d-Bicuculline ≥98%
59457 右旋四氫巴馬汀 d-Tetrahydropalmatine ≥98%
59458 育亨賓 Yohimbine ≥97%
59459 鳶尾苷元磺酸鈉 Tectorigenin ≥98%
59460 原花青素 Procyanidin ≥98%
59461 原花青素B2 Procyanidin B2 ≥98%
59462 原花青素B3 Procyanidin B3 ≥98%
59463 原人參二醇（PPD） Protopanaxadiol ≥95%
59464 原人參三醇(PPT) Protopanaxatriol ≥98%
59465 澤蘭黃酮 Hispidulin ≥98%
59466 澤瀉醇B-23-醋酸酯 AlisolB-23-acetate ≥97%
59467 獐芽菜苦苷 Swertiamarine ≥98%
59468 芝麻酚 Sesamol 99%
59469 知母皂苷A-Ⅲ Timosaponin A-Ⅲ ≥98%
59470 知母皂苷元 Sarsasapogenin ≥98%
59471 竹葉香附素A Raddeanin(Anemodeanin) A ≥98%
59472 紫草酸 lithospermic acid 98%
59473 紫堇靈 Corynoline ≥98%
59474 紫杉葉素 (+)-Taxifolin ≥98%
59475 紫云英苷 Astragalin ≥98%
59476 祖師麻甲素 Daphnetin ≥98%
59477 * Daphnetin ≥98%
59478 醉椒素 Kavain ≥99%
59479 千金藤啶堿 L-Stepholidine ≥98%
59480 1,8-二羥基葸醌 1,8-Dihydroxyanthraquinone ≥98.0%
59481 10-脫乙酰基巴卡丁Ⅲ 10-Deacetylbaccatine III ≥98%
59482 20(S)-人參皂苷F1 20(S)-Ginsenoside F1(3b,6a,12b)-3,6,12-Trihydroxydammar-24-ene-20-yl beta-D-glucopyranoside ≥97%
59483 20(S)-人參皂苷F2 20(S)-Ginsenoside-F2 ≥97%
59484 20(S)-* Ginsenoside-Rg3 ≥97%
59485 20(S)-人參皂苷-RH2 20(S)-Ginsenoside-RH2 ≥98%
59486 23-羥基白樺酸 Anemosapogenin ≥98%
59487 25-羥基-原人參二醇 25-OH-Protopanaxdiol ≥97%
59488 25-羥基-原人參三醇 25-OH-Protopanaxtiol ≥97%
59489 3,6’－二芥子酰基蔗糖 3,6’－Disinapoyl sucrose ≥95%
59490 3’-甲氧基* 3’- Methoxy Puerarin ≥99%
59491 3’-羥基* 3'-hydroxy Puerarin ≥97%
59492 4-去甲氧基* 4'-Demethylpodophyllotoxin ≥97%
59493 6-羥基-7甲氧基香豆素 6-hydroxy-7-methoxy-2H-chromen-2-one 97%
59494 花椒毒素 8-Methoxypsoralen 8-甲氧基補(bǔ)骨脂素 ≥98%
59495 β,β-二甲基丙烯酰紫草素 β,β-dimethylacrylshikonin ≥97%
59496 β-常山堿人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒 β-Febrifugine 97%
59497 巴卡亭III Baccatin III ≥98%
59498 菝葜皂苷元 Sarsasapogenin ≥98%
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因：
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法：
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請分批操作。
3 孵育：可能原因：
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2) 孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法：
1) 貼封片或加蓋；
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因：
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法：
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒顯色：可能原因：
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑；
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法：
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流；
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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