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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
59500 樺木酸 Betulinic acid ≥98%
59501 白蠟樹精 fraxinol ≥97%
59502 白屈菜堿 Chelidonine 95%
59503 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ Atractylenolide III ≥98%
59504 白頭翁皂苷A3 Anemoside A3 Pulchinenoside A3 95%
59505 表兒茶素EC EC ≥98%
59506 表兒茶素沒食子酸酯(ECG) ECG ≥98%
59507 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG) EGCG ≥98%
59508 補(bǔ)骨脂定 Psoralidin ≥97%
59509 補(bǔ)骨脂甲素 Bavachin(補(bǔ)骨脂二氫黃酮) 97%
59510 補(bǔ)骨脂乙素 Isobavachalcone(異補(bǔ)骨脂查爾酮) 97%
59511 長春地辛 Vindesine 95%
59512 川續(xù)斷皂苷VI Akebia saponin D ≥98%
59513 *內(nèi)酯 Andrographolide ≥98%
59514 *乙素 Andrographolide ≥98%
59515 刺五加苷D Eleutheroside D ≥98.0%
59516 德爾塔林 deltaline ≥97%
59517 丁香醛 3,5-Dimethoxy-4-hydroxybenzaldehyde ≥97%
59518 東莨菪內(nèi)酯即東莨菪素 Gelseminic acid, Chrysatropic acid, 6-Methylesculetin 98%
59519 東莨菪素 Scopoletin ≥98%
59520 椴樹苷 Tiliroside ≥98%
59521 莪二酮 Curdione ≥98%
59522 莪術(shù)二酮 Curdione ≥98%
59523 杠柳毒苷 Periplocin ≥97%
59524 高車前苷 Homoplantaginin >98% >94%
59525 戈米辛G Gomisin G ≥97%
59526 戈米辛J Gomisin J ≥94%
59527 古倫賓 Columbin ≥95%
59528 光翠雀堿 denudatine ≥95%
59529 桂皮酸 Cinnamic acid 98%
59530 肉桂酸 Cinnamic acid 98%
59531 海柯皂苷元 hecogenin ≥95%
59532 粉防己堿 d-Tetrandrine ≥98%
59533 防己諾林堿 Hanfangchin B(Fangchinoline) ≥98%
59534 2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside ≥97%
59535 槲皮素-3-O-葡萄糖苷 Isoquercitrin ≥98%
59536 黃花菜木脂素A Cleomiscosin A ≥95%
59537 黃芪皂苷-Ⅰ AstragalosideⅠ ≥98%
59538 黃芪皂苷-Ⅱ Astragaloside -Ⅱ ≥98%
59539 黃芪皂苷-Ⅲ Astragaloside -Ⅲ ≥98%
59540 茴芹香豆素 Pimpinellin ≥98%
59541 假荊芥屬苷 Nepetin-7-glucoside >96%
59542 梔子苷 Geniposide ≥98%
59543 開環(huán)異落葉松樹脂酚 Secoisolariciresinol ≥98%
59544 老鸛草素 Geraniin 97%
59545 *次堿 wilforine ≥98%
59546 *定堿 wilfordine ≥97%
59547 *紅素 Celastrol (Tripterin, Tripterine) ≥98%
59548 南蛇藤素 Celastrol (Tripterin, Tripterine) ≥98%
59549 *吉堿 wilforgine ≥97%
59550 櫟櫻酸 Roburic acid ≥98%
59551 連翹脂苷A Forsythiaside A ≥95%
59552 連翹脂苷B Forsythoside B ≥98%
59553 靈芝酸A GANODERIC ACID A ≥94%
59554 靈芝酸B GANODERIC ACID B ≥94%
59555 蘆薈苷A Barbaloin A ≥98%
59556 魯斯可皂苷元 RUSCOGENIN 鑒別用(80%)
59557 羅漢果皂甙IV Mogroside IⅤ ≥98%
59558 洛塞琳 Rosarin ≥95%
59559 洛緦人磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒 Rosin 97%
59560 芒柄花素 刺芒柄花素 Formononetin ≥98%
59561 芒柄花素-7-O-葡萄糖苷 Fomononetin-7-O-glucoside/ononin 95%
59562 沒食子兒茶素GC (?)-Gallocatechin 97%
59563 沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG) -GCG ≥98%
59564 擬人參皂苷F1l Pseudoginsenoside F11 ≥98%
59565 鳥苷 GUANOSINE ≥95%
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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