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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
60350 Anti-CD44v6 CD44V6抗體 0.1ml
60351 Anti-CD44v7 CD44V7抗體 0.2ml
60352 Anti-Anti-CD44v10 CD44V10抗體 0.2ml
60353 Anti-CD45/B220 白細(xì)胞共同抗原抗體 0.1ml
60354 Anti-CD45 CD45單克隆抗體 0.1ml
60355 Anti-CD46/MCP 膜輔蛋白抗體 0.2ml
60356 Anti-CD46/MCP 膜輔蛋白抗體 0.2ml
60357 Anti-CD45RO CD45RO抗 0.1ml
60358 Anti-CD48/SLAMF2 CD48抗體 0.2ml
60359 Anti-CD58/LFA-3 淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-3抗體 0.2ml
60360 Anti-Integrin alpha 2/CD49b 整合素α2抗體 0.1ml
60361 Anti-CD5 CD5抗體 0.2ml
60362 Anti-CD5L/Api6 CD5L抗體 0.2ml
60363 Anti-CD6/TP120 CD6抗體 0.2ml
60364 Anti-CD54/ICAM-1 細(xì)胞間粘附分子-1抗體 0.1ml
60365 Anti-ICAM-2/CD102 細(xì)胞間粘附分子-2抗體 0.2ml
60366 Anti-ICAM-3/CD50 細(xì)胞間粘附分子-3抗體 0.2ml
60367 Anti-CD55/DAF 衰變加速因子CD55抗體 0.2ml
60368 Anti-CD59 CD59抗體 0.2ml
60369 Anti-CD56/NCAM1 CD56抗體 0.1ml
60370 Anti-CD56/NCAM1 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1抗體 0.1ml
60371 Anti-CD171/NCAM-L1 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1抗體 0.2ml
60372 Anti-CD172a/SIRP Alpha 信號調(diào)節(jié)蛋白α抗體 0.2ml
60373 Anti-CD57 CD57抗體 0.1ml
60374 Anti-CD68 CD68抗體 0.2ml
60375 Anti-CD68 CD68抗體 0.2ml
60376 Anti-CD69/CLEC2C/AIM 活化誘導(dǎo)分子CD69抗體 0.2ml
60377 Anti-CD72/Ly-32 CD72蛋白抗體 0.2ml
60378 Anti-CD74/MHC II CD74抗體 0.2ml
60379 Anti-CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗體 0.2ml
60380 Anti-CD80/B7-1 刺激分子B7-1蛋白抗體 0.1ml
60381 Anti-CD71/TFR 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體 0.1ml
60382 Anti-B7-1/CD80 刺激分子B7-1蛋白抗體 0.1ml
60383 Anti-CD73 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ抗體 0.1ml
60384 Anti-CD79A/IGBP-1 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體 0.2ml
60385 Anti-CD82/KAI1 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體 0.1ml
60386 Anti-CD83/HB15 CD83抗體 0.2ml
60387 Anti-CD84/SLAMF5 CD84抗體 0.2ml
60388 Anti-CD8 CD8單克隆抗體 0.1ml
60389 Anti-CD86/B7-2 CD86抗體 0.1ml
60390 Anti-CD244 CD244抗體 0.2ml
60391 Anti-BLAME/SLAMF8 BLAME抗體 0.2ml
60392 Anti-Cdc2/CDK1 周期素依賴激酶1抗體 0.2ml
60393 Anti-Phospho-cdc2 (Thr14) 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 0.1ml
60394 Anti-Phospho-cdc2 (Tyr15) 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 0.1ml
60395 Anti-Phospho-cdc2 (Thr161) 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 0.1ml
60396 Anti-cdc25A 細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 0.2ml
60397 Anti-Phospho-cdc25A (Thr506) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 0.1ml
60398 Anti-Phospho-cdc25A (Ser76) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 0.1ml
60399 Anti-Phospho-cdc25A (Ser178) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 0.1ml
60400 Anti-Phospho-cdc25C (Ser216) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25C抗體 0.1ml
60401 Anti-Phospho-cdc25C (Thr48) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25C抗體 0.1ml
60402 Anti-CD335/NKp46/NCR1 人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA試劑盒 細(xì)胞毒性受體NK-p46抗體 0.2ml
60403 Anti-CD336/NKp44/NCR2 細(xì)胞毒性受體NK-p44抗體 0.2ml
60404 Anti-CD337/NKp30/NCR3 細(xì)胞毒性受體NK-p30抗體 0.2ml
60405 Anti-CD328/Siglec-7 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素7抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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