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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
64028 Anti-ET-1/FITC 熒光素標記內皮素-1抗體IgG 0.2ml
64029 Anti-ET-1/FITC 熒光素標記內皮素-1抗體IgG 0.2ml
64030 Anti-ET-1/FITC 熒光素標記內皮素-1抗體IgG 0.2ml
64031 Anti-ET-1/HRP 辣根過氧化物酶標記內皮素-1單克隆抗體IgG 0.2ml
64032 Anti-ETK/BMX/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠非受體性蛋白*激酶ETK抗體IgG 0.2ml
64033 Anti-Phospho-ETK (Tyr40) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體性蛋白*激酶ETK抗體IgG 0.2ml
64034 Anti-E Tag/FITC 熒光素標記抗E Tag抗體IgG 0.2ml
64035 Anti-ets1/E26 /FITC 熒光素標記Ets轉錄因子家族ets1抗體IgG 0.2ml
64036 Anti-Eukaryotic aspartyl protease/FITC 熒光素標記天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體IgG 0.2ml
64037 Anti-EV71/FITC 熒光素標記腸道病毒71型/手足口病病毒抗體IgG 0.2ml
64038 Anti-EV71(CT)/FITC 熒光素標記腸道病毒71型/手足口病病毒抗體(C端)IgG 0.2ml
64039 Anti-EXPB-2/FITC 熒光素標記植物延展素-βIgG 0.2ml
64040 Anti-Ezrin/Radixin/FITC 熒光素標記埃茲蛋白抗體IgG 0.2ml
64041 Anti-Phospho-Ezrin (Tyr353) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化埃茲蛋白抗體IgG 0.2ml
64042 Anti-Phospho-Ezrin (Thr567) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化埃茲蛋白抗體IgG 0.2ml
64043 Anti-Fabp2 /FITC 熒光素標記脂肪酸結合蛋白2抗體IgG 0.2ml
64044 Anti-FABP(brain)/FITC 熒光素標記腦型脂肪酸結合蛋白抗體IgG 0.2ml
64045 Anti-factor V/FITC 熒光素標記*5抗體IgG 0.2ml
64046 Anti-factor VIII/FITC 熒光素標記第八因子相關抗原抗體IgG 0.2ml
64047 Anti-factor VIII/FITC 熒光素標記第八因子相關抗原抗體IgG 0.2ml
64048 Anti-factor X III /FITC 熒光素標記*ⅩⅢ抗體IgG 0.2ml
64049 Anti-FADD/FITC 熒光素標記Fas死亡結構域相關蛋白抗體IgG 0.2ml
64050 Anti-FADD/FITC 熒光素標記Fas相關死亡結構域蛋白抗體IgG 0.2ml
64051 Anti-Phospho-FADD (Ser191) Mouse Specific /FITC 熒光素標記兔抗小鼠磷酸化Fas相關死亡結構域蛋白抗體IgG 0.2ml
64052 Anti-Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr766) /FITC 熒光素標記磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體IgG 0.2ml
64053 Anti-P-FADD/FITC 熒光素標記磷酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體IgG 0.2ml
64054 Anti-FAF1/FITC 熒光素標記Fas相關1因子抗體IgG 0.2ml
64055 Anti-FAK/FITC 熒光素標記粘著斑激酶抗體 0.2ml
64056 Anti-FAK2/Pyk2/FITC 熒光素標記富含*的*激酶2抗體IgG 0.2ml
64057 Anti-phospho-Pyk2 (Tyr402)/FITC 熒光素標記磷酸化富含*的*激酶2抗體IgG 0.2ml
64058 Anti-phospho-Pyk2 (Tyr881) /FITC 熒光素標記磷酸化富含*的*激酶2抗體IgG 0.2ml
64059 Anti-FAM3A/FITC 熒光素標記胰腺衍生因子抗體IgG 0.2ml
64060 Anti-FAM3B/PANDER /FITC 熒光素標記胰腺衍生因子抗體IgG 0.2ml
64061 Anti-FANCD2/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠FANCD2抗體IgG 0.2ml
64062 Anti-FANCD2(phospho Ser222) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化FANCD2抗體IgG 0.2ml
64063 Anti-FANCF/FITC 熒光素標記范可尼貧血相關蛋白F抗體IgG 0.2ml
64064 Anti-FAS/FITC 熒光素標記FAS蛋白抗體IgG 0.2ml
64065 Anti-FASN/FITC 熒光素標記抗脂肪酸合成酶抗體IgG 0.2ml
64066 Anti-FasL/FITC 熒光素標記FasL蛋白抗體IgG 0.2ml
64067 Anti-FAST kinase/FITC 熒光素標記抗Fas活化的絲/*激酶抗體IgG 0.2ml
64068 Anti-FBN1 /FITC 熒光素標記原纖維蛋白1抗體IgG 0.2ml
64069 Anti-Fc GammaR II A/CD32a/FITC 熒光素標記免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體IgG 0.2ml
64070 Anti-FDC-SP/FITC 熒光素標記抗B淋巴細胞表面結合蛋白抗體IgG 0.2ml
64071 Anti-Fe65 protein/FITC 熒光素標記Fe65 蛋白抗體IgG 0.2ml
64072 Anti-FGF1/FITC 熒光素標記酸性成纖維細胞生長因子 0.2ml
64073 Anti-FGF3/Oncogene INT2 /FITC 熒光素標記纖維母細胞生長因子3抗體IgG 0.2ml
64074 Anti-FGF4/HSTF1/HBGF-4/FITC 熒光素標記纖維母細胞生長因子4抗體IgG 0.2ml
64075 Anti-FGF5/FITC 熒光素標記纖維母細胞生長因子5抗體IgG 0.2ml
64076 Anti-KGF/FGF-7/FITC 熒光素標記角質形成細胞生長因子受體/纖維母細胞生長因子-7抗體IgG 0.2ml
64077 Anti-FGF-8/HBGF-8/FITC 熒光素標記成纖維細胞生長因子-8/纖維母細胞生長因子-8抗體IgG 0.2ml
64078 Anti-FGF-13/FITC 熒光素標記抗纖維母細胞生長因子-13抗體IgG 0.2ml
64079 Anti-FGF-10/FITC 人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒熒光素標記成纖維細胞生長因子-10/纖維母細胞生長因子-10抗體IgG 0.2ml
64080 Anti-bFGF-R/FGFR1/FITC 熒光素標記纖維母細胞生長因子受體1抗體IgG 0.2ml
64081 Anti-PLCG 1/PLC gamma 1/FITC 熒光素標記磷酯酶Cγ1抗體IgG 0.2ml
64082 Anti-PLCG 2/PLC gamma 2/FITC 熒光素標記磷酯酶Cγ2抗體IgG 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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