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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人*ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人*ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
65208 Anti-phospho-P53 (Ser6)/FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65209 Anti-phospho-P53 (Ser9)/FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65210 Anti-phospho-P53 (Thr18) /FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65211 Anti-phospho-P53 (Thr81)/FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65212 Anti-phospho-P53 (Ser20)/FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65213 Anti-phospho-P53 (Ser315)/FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65214 Anti-phospho-P53 (Ser33) /FITC 熒光素標記磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體IgG 0.2ml
65215 Anti-p58ipk/FITC 熒光素標記p58ipk抗體IgG 0.2ml
65216 Anti-Phospho-p63 (Ser395) /FITC 熒光素標記磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體IgG 0.2ml
65217 Anti-p70 S6 Kinase/P70 Beta1/FITC 熒光素標記p70S6Kb抗體IgG 0.2ml
65218 Anti-P73 protein/FITC 熒光素標記P73腫瘤抑制基因抗體IgG 0.2ml
65219 Anti-Phospho-p73 (Tyr99) /FITC 熒光素標記磷酸化P73腫瘤抑制基因抗體IgG 0.2ml
65220 Anti-p70 S6 Kinase Beta2/P70 Beta2/FITC 熒光素標記核糖體S6蛋白激酶β2抗體IgG 0.2ml
65221 Anti-Phospho-p63 (Ser455)/FITC 熒光素標記磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體IgG 0.2ml
65222 Anti-Phospho-p63 (Ser160/Ser162) /FITC 熒光素標記磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體IgG 0.2ml
65223 Anti-P311 protein/FITC 熒光素標記神經再生相關蛋白抗體IgG 0.2ml
65224 Anti-VIP receptor II/FITC 熒光素標記腺苷酸環化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體IgG 0.2ml
65225 Anti-PACAP/VIP receptor-I /FITC 熒光素標記腺苷酸環化酶激活肽受體-I/血管活性腸肽-I抗體IgG 0.2ml
65226 Anti-PACAP-27/38 /FITC 熒光素標記腺苷酸環化酶激活肽-27/38抗體IgG 0.2ml
65227 Anti-PACAP-38 /FITC 熒光素標記腺苷酸環化酶激活肽-38抗體IgG 0.2ml
65228 Anti-PADI4/PAD4 /FITC 熒光素標記關節炎相關基因抗體IgG 0.2ml
65229 Anti-PAF/FITC 熒光素標記血小板活化因子抗體IgG 0.2ml
65230 Anti-PAFR/FITC 熒光素標記抗血小板活化因子受體抗體IgG 0.2ml
65231 Anti-PAI-1/FITC 熒光素標記纖溶酶原激活物抑制因子抗體IgG 0.2ml
65232 Anti-PAI-2/FITC 熒光素標記纖溶酶原激活物抑制因子2抗體體IgG 0.2ml
65233 Anti-PALB2/FITC 熒光素標記乳腺癌易感基因相關蛋白2IgG 0.2ml
65234 Anti-Pan-ras/FITC 熒光素標記抗Pan ras抗體IgG 0.2ml
65235 Anti-PAP2c /FITC 熒光素標記磷脂酸磷酸酶2C抗體IgG 0.2ml
65236 Anti-PAR-1/FITC 熒光素標記蛋白酶激活受體-1抗體IgG 0.2ml
65237 Anti-PAR-2/FITC 熒光素標記蛋白酶激活受體-2抗體IgG 0.2ml
65238 Anti-PAR4/FITC 熒光素標記蛋白酶活化受體4/前列腺細胞凋亡反應蛋白4抗體IgG 0.2ml
65239 Anti-PARP/FITC 熒光素標記多腺苷二磷酸多聚酶抗體IgG 0.2ml
65240 Anti-Parkin protein/FITC 熒光素標記帕金蛋白抗體IgG 0.2ml
65241 Anti-Parvalbumin/FITC 熒光素標記微白蛋白/細小清蛋白抗體IgG 0.2ml
65242 Anti-PAX1/FITC 熒光素標記配對盒基因1抗體IgG 0.2ml
65243 Anti-PAX2/FITC 熒光素標記配對盒基因2抗體IgG 0.2ml
65244 Anti-RACK1/FITC 熒光素標記受體激活蛋白激酶C1抗體IgG 0.2ml
65245 Anti-PAX3/FITC 熒光素標記配對盒基因3抗體IgG 0.2ml
65246 Anti-PAX5/FITC 熒光素標記配對盒基因5抗體IgG 0.2ml
65247 Anti-PAX7/FITC 熒光素標記配對盒基因7抗體IgG 0.2ml
65248 Anti-PAX8/FITC 熒光素標記配對盒基因8抗體IgG 0.2ml
65249 Anti-PAX9/FITC 熒光素標記配對盒基因9抗體IgG 0.2ml
65250 Anti-P-cadherin/FITC 熒光素標記P-鈣粘附分子抗體IgG 0.2ml
65251 Anti-R-cadherin /FITC 熒光素標記R-鈣粘附分子抗體IgG 0.2ml
65252 Anti-PCNA/FITC 熒光素標記兔抗增值細胞核抗原抗體IgG 0.2ml
65253 Anti-PCNA/FITC 熒光素標記增殖細胞核抗原抗體IgG 0.2ml
65254 Anti-PCNA/FITC 熒光素標記增殖細胞核抗原抗體IgG 0.2ml
65255 Anti-PCNA/FITC 熒光素標記增殖細胞核抗原抗體IgG 0.2ml
65256 Anti-PCX/FITC 熒光素標記足細胞特異蛋白抗體 0.2ml
65257 Anti-PD-1/FITC 熒光素標記程序性死亡1抗體IgG 0.2ml
65258 ANti-PDCD4/FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白4抗體IgG 0.2ml
65259 Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白TFAR19抗體IgG 0.2ml
65260 Anti-PDE4D/FITC 人*ELISA試劑盒熒光素標記磷酸二酯酶4D抗體IgG 0.2ml
65261 Anti-PDEF/FITC 熒光素標記上皮特異性ETs轉錄因子抗體IgG 0.2ml
65262 Anti-PDGF-A/FITC 熒光素標記血小板源性生長因子-A抗體IgG 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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