人總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

65764 Anti-T7 tag/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記T7 tag標(biāo)簽抗體IgG  0.2ml
65765 Anti-TFF3 /FITC  熒光素標(biāo)記三葉肽因子3抗體IgG  0.2ml
65766 Anti-TFF2/FITC  熒光素標(biāo)記三葉肽因子2抗體IgG  0.2ml
65767 Anti-TFPI/LACI /FITC  熒光素標(biāo)記組織因子途徑抑制劑抗體IgG  0.2ml
65768 Anti-TFPI-2/FITC  熒光素標(biāo)記組織因子途徑抑制劑-2抗體IgG  0.2ml
65769 Anti-TFR/CD71/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體IgG  0.2ml
65770 Anti-CD72/Ly-32/FITC  熒光素標(biāo)記CD72抗體IgG  0.2ml
65771 Anti-CD74(MHC II )/FITC  熒光素標(biāo)記CD74抗體IgG  0.2ml
65772 Anti-TGF- Alpha /FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–α抗體IgG  0.2ml
65773 Anti-TGF- Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記TGF-β1抗體IgG(標(biāo)記抗體)  0.2ml
65774 Anti-TGF- Beta2 /FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β2抗體IgG  0.2ml
65775 Anti-TGF- Beta3/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β3抗體IgG  0.2ml
65776 Anti-TGF- BetaR1/ALK /FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1抗體IgG  0.2ml
65777 Anti-TGF- BetaR 2/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體2抗體IgG  0.2ml
65778 Anti-TGF- BetaR 3/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體3抗體IgG  0.2ml
65779 Anti-TGM3/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體IgG  0.2ml
65780 Anti-Thioredoxin 1/FITC  熒光素標(biāo)記硫氧還蛋白抗體IgG  0.2ml
65781 Anti-Thymosin Alpha-1/FITC  熒光素標(biāo)記* α-1抗體IgG  0.2ml
65782 Anti-Tie1/FITC  熒光素標(biāo)記血管生成素-1受體抗體IgG  0.2ml
65783 Anti-Tie2/FITC  熒光素標(biāo)記上皮生長(zhǎng)因子樣域*激酶2IgG  0.2ml
65784 Anti-Phospho-Tie2 (Tyr992) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血管生成素受體2抗體IgG  0.2ml
65785 Anti-Phospho-Tie2 (Ser1119) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血管生成素受體2抗體IgG  0.2ml
65786 Anti-TIEG1/KLF10/FITC  熒光素標(biāo)記TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體IgG  0.2ml
65787 Anti-RALDH2/FITC  熒光素標(biāo)記*脫氫酶2型抗體IgG  0.2ml
65788 anti-RARRES1/TIG1/FITC  熒光素標(biāo)記*受體應(yīng)答蛋白1抗體IgG  0.2ml
65789 Anti-TIGAR humen/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人TIGAR蛋白抗體IgG  0.2ml
65790 anti-Rarres2/TIG2/FITC  熒光素標(biāo)記*受體應(yīng)答蛋白2抗體IgG  0.2ml
65791 Anti-Rarres3/TIG3/Chemerin/FITC  熒光素標(biāo)記*受體應(yīng)答蛋白3抗體IgG  0.2ml
65792 Anti-rInsulin /HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗*抗體IgG  0.2ml
65793 Anti-rInsulin /FITC  熒光素標(biāo)記抗*抗體IgG  0.2ml
65794 Anti-rInsulin human monoclonal/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠*單克隆抗體IgG  0.2ml
65795 Anti-rInsulin monoclonal (pig)/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗胰島素單克隆抗體（豬）IgG  0.2ml
65796 Anti-TIMP-1/FITC  熒光素標(biāo)記金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體IgG  0.2ml
65797 Anti-TIMP-2/FITC  熒光素標(biāo)記金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體IgG  0.2ml
65798 Anti-TIMP-3/FITC  熒光素標(biāo)記金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體IgG  0.2ml
65799 Anti-TIMP-4/FITC  熒光素標(biāo)記金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體IgG  0.2ml
65800 Anti-TIF1 Alpha/TRIM24/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體IgG  0.2ml
65801 Anti-TIF1 beta/KAP1/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體IgG  0.2ml
65802 Anti-Phospho-TIF1beta (Ser824)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體IgG  0.2ml
65803 Anti-TLK1/FITC  熒光素標(biāo)記調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體IgG  0.2ml
65804 Anti-Phospho-TLK1 (Ser695)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體IgG  0.2ml
65805 Anti-TIF1 gamma/Trim33/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1γ抗體IgG  0.2ml
65806 Anti-Tissue factor/CD142/CF3/F3/FITC  熒光素標(biāo)記組織因子抗體IgG  0.2ml
65807 Anti-TLR1/FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體1抗體IgG  0.2ml
65808 Anti-TLR2/CD282 /FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體2抗體IgG  0.2ml
65809 Anti-TLR3 /FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體3抗體IgG  0.2ml
65810 Anti-TLR4/FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體4抗體IgG  0.2ml
65811 Anti-TLR5/CD285 /FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體5抗體IgG  0.2ml
65812 Anti-TLR6/CD286/FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體6抗體IgG  0.2ml
65813 Anti-TLR9/CD289/FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體9抗體IgG  0.2ml
65814 Anti-TLR11/FITC  熒光素標(biāo)記Toll樣受體11抗體IgG  0.2ml
65815 Anti-TM/FITC 人總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒 熒光素標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG  0.2ml
65816 Anti-TM/Biotin  *化血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG  0.2ml
65817 Anti-TNF- Alpha /Gold  膠體金離子標(biāo)記腫瘤壞死因子抗體  0.2ml
65818 Anti-A/H1N1-M2 Human /Biotin  *標(biāo)記兔抗人A型人流感病毒H1N1-M2抗體IgG  0.2ml

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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