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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
66553 AATK peptide 細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)*激酶抗原 0.5mg
66554 AQP-2 (aquaporin Protein-2) 水通道蛋白-2(抗原) 0.5mg
66555 ABCA1(ATP binding cassette transporter A1) 腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗原 0.5mg
66556 ABCG1 peptide 三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原 0.5mg
66557 BACE( ASP2 ) β分泌酶(抗原) 0.5mg
66558 ABL1(v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1) ABL1抗原 0.5mg
66559 Bassoon(BSN) 0.5mg
66560 Bax peptide Bax(多肽抗原) 0.5mg
66561 Bcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原) 0.5mg
66562 BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原) 0.5mg
66563 ACA11 peptide 擬南芥ACA11蛋白多肽抗原 0.5mg
66564 AHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥) 0.5mg
66565 bFGF 堿性成纖維細(xì)胞生長因子(多肽抗原) 0.5mg
66566 ACE2(Angiotensin converting enzyme 2) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗原 0.5mg
66567 BNP 腦鈉素(多肽抗原) 0.5mg
66568 BrdU (Bromodeoxyuridine) 溴脫氧尿苷 50mg
66569 C5 過敏毒素C5(補(bǔ)體C5)抗原 0.5mg
66570 CA125 (Ovarian cancer Anti-gen) 卵巢癌抗原(抗原) 0.5mg
66571 CK19 細(xì)胞角蛋白19抗原 0.5mg
66572 CAD(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶(抗原) 0.5mg
66573 Calponin 1 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1(抗原) 0.5mg
66574 Caspase-1 (ICE; CASP-1;P45) 天冬氨酸-*特異性蛋白酶家族(抗原) 0.5mg
66575 Caspase-3 (CPP32) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原) 0.5mg
66576 Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原) 0.5mg
66577 Caspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原) 0.5mg
66578 Caspase-9 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6(抗原) 0.5mg
66579 Caspase-9 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6(抗原) 0.5mg
66580 AD7C-NTP/NTP/AF peptide 神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽抗原(人) 0.5mg
66581 Caspase-10 半胱胺酸蛋白酶-10(抗原) 0.5mg
66582 Caspase-13 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13(抗原) 0.5mg
66583 CD19(B-lymphocyte Anti-gen CD19 precursor) CD19(抗原) 0.5mg
66584 DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原(N端) 0.5mg
66585 DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原 0.5mg
66586 AEG-1 peptide AEG-1抗原 0.5mg
66587 CD31 (PECAM-1) 血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(抗原) 0.5mg
66588 ADFP/ADRP/adipophilin 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原 0.5mg
66589 Immunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1 0.5mg
66590 CD133 Anti-gen 造血干細(xì)胞抗原(多肽抗原) 0.5mg
66591 c-erbB-2蛋白 c-erbB-2蛋白(抗原) 0.5mg
66592 ChAT(Choline Acetyltransferase) *乙酰轉(zhuǎn)移酶(抗原) 0.5mg
66593 ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2) 毒蕈堿型乙酰*受體(抗原) 0.5mg
66594 C-Peptide( C-PEP ) C-肽(C肽) 0.5mg
66595 CR (Calretinin) 鈣結(jié)合蛋白(抗原) 0.5mg
66596 CRP (C-reactive protin) C-反應(yīng)蛋白(抗原) 0.5mg
66597 ADORA3/A3AR(adenosine receptor A3) 腺苷受體A3抗原 0.5mg
66598 Integrin AlphaV (Integrin alpha V) 巨噬細(xì)胞來源的趨化因子αV抗原 0.5mg
66599 CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原) 0.5mg
66600 phospho-CREB-1 磷酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(多肽) 0.1mg
66601 ADRA2 peptide 腎上腺素能受體2抗原 0.5mg
66602 CRF (Corticotropin-Releasing Factor) 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 0.5mg
66603 CT (Calcitonin ) 降鈣素(抗原) 0.5mg
66604 CT-R (Calcitonin receptor) 降鈣素受體(抗原) 0.5mg
66605 Cytochrome C 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒細(xì)胞色素 C(抗原) 0.5mg
66606 ADRB3/ Beta3-AR ( Beta3-adrenergic receptor) 腎上腺素能受體β3 0.5mg
66607 Cytomegalovirus (CMV)PP65 細(xì)胞巨化病毒(多肽) 0.5mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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