本方法要著重注意的是RF(1gM類)及其他非特異IgM的干擾。RF(1gM類)由于其能與固相抗人u鏈抗體結合，并可與隨后加入的酶標抗體(動物IgG)反應，從而導致假陽性反應。大鼠ELISA試劑盒而非特異IgM由于其在*步溫育中，可與特異IgM競爭與固相抗體結合，所以會影響測定的靈敏度。因此，使用本法測IgM，必須對臨床樣本進行適當稀釋。樣本稀釋后，上述產生干擾作用的非特異IgM含量減少，而特異IgM由于處于相應病原體的急染期，滴度很高，一定稀釋后，不會有明顯影響，況且，在某些病原體如HBV的慢染階段，IgM類特異抗體也能持續存在，只不過滴度要低很多。
1．首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗體，洗滌去除未與固相結合或結合不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結合的部分及雜質。
2．加入含待測IgM抗體的臨床樣本如血清等，溫育一定時間后洗板；此時，大鼠ELISA試劑盒待測樣本中的IgM抗體就會與固相上的抗P鏈抗體反應而吸附于固相上。
3．加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等，溫育一定時間后洗板；此時，特異抗原就會與固相上的特異IgM抗體發生反應。
4．加入酶標記的抗特異抗原的抗體，溫育一定時間后洗板；此時，在固相上即形成相應的抗原抗體復合物。
因此，如不對血清樣本稀釋，就直接檢測，即使是沒有非特異IgM的干擾，陽性測定結果也沒有急染的診斷價值。現在，有些試劑生產廠家，為了迎合臨床實驗室減輕勞動強度、大鼠ELISA試劑盒簡便操作的要求，生產了不需對樣本進行稀釋的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA試劑盒，現有不少實驗室也在使用。鑒于上面提到的原因，我們建議臨床實驗室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等類檢測時，應使用對樣本進行稀釋的試劑盒，以保證檢測的臨床價值。
