博研生物：免疫組化操作流程
閱讀：360發(fā)布時(shí)間：2013-1-5
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免疫組化操作流程
（一）儀器設(shè)備
1.18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或用微波爐.
2.水浴鍋
（二）試劑
1.PBS緩沖液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,
KH2PO41.4mmol/L.
2．0.01mol/L檸檬酸鈉緩沖液（CB,ph6.0,1000ml）：檸檬酸三鈉3g,檸檬酸0.4g。
3．0.5mol/LEDTA緩沖液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA&
8226;2H2O,用10mmol/L
NaOH調(diào)至ph8.0,加水至1000ml.
4.1mol/L的TBS緩沖液（ph8.0）：在800ml水中溶解121gTris堿，用1N的HCl調(diào)至ph8.0,加水1000ml。
5.酶消化液：a.0.1%*：用0.1%CaCl12（ph7.8）配制。b.0.4%*液：用0.1N的HCl配制。
6.3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制
7.風(fēng)裱劑：a.甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（ph9.0–9.5）等量混合
b油和TBS（PBS）配制
8．TBS/PBSPH9.0–9.5,適用于熒光纖維鏡標(biāo)本;ph7.0-7.4適合光學(xué)纖維標(biāo)本。
（三）操作流程
1脫蠟和水化：脫蠟前應(yīng)將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。a組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯后在浸泡10分鐘
b無(wú)水乙醇中浸泡五分鐘
c95%乙醇中浸泡五分鐘
d75%乙醇中浸泡五分鐘
2抗原修復(fù)：用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片：
A抗原熱修復(fù)
a高壓熱修復(fù)在沸水中加入EDTA（ph8.0）或0.01m*緩沖溶液（ph6.0）.蓋上不銹鋼鍋蓋，但不能鎖定。將玻片置于金屬染色加上，緩慢加壓，是玻片在緩沖液中浸泡五分鐘，然后將蓋子鎖定，小閥門將會(huì)升起來(lái)。10分鐘后除去熱源，置入涼水中，當(dāng)小閥門沉下去后打開(kāi)蓋子。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的抗原修復(fù)。
b沸熱修復(fù)電爐或水浴鍋加熱0.01*緩沖液（ph6.0）至95℃左右，放入組織芯片加熱10-15分鐘。
C微波爐加熱在微波爐里加熱0.01*緩沖液（ph6.0）至沸騰后將組織芯片放入，斷電，間隔5-10分鐘，反復(fù)1-2次。適用的抗原：
Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.
ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等
B酶消化方法
常用0.1%*和0.4%*液。*使用前預(yù)熱37℃，消化時(shí)間約為5-30分鐘。適用于被固定遮蔽的抗原：包括Collagen.GFAP.
Complement.Cytokeratin.C-erB-2.LCA.LN.等
3免疫組化染色
SP法
（1）脫蠟、水化（2）PBS洗2-3次各5分鐘（3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在
TMA上，室溫靜置10分鐘（4）PBS洗2-3次各5分鐘（5）抗原修復(fù)
（6）PBS洗2-3次各5分鐘（7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多余液體（8）滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時(shí)或4℃過(guò)夜或37℃1小時(shí)（9）4℃過(guò)夜后需在37℃復(fù)溫45分鐘（10）PBS洗3次每次2分鐘
（11）滴加Ⅱ抗45-50μl,室溫靜置或37℃1小時(shí)（12）Ⅱ抗中可加入0.05%的
tween-20.（13）PBS洗3次各5分鐘（14）DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度（15）PBS或自來(lái)水沖洗10分鐘（16）蘇木精復(fù)染2分鐘，鹽酸酒精分化（17）自來(lái)水沖洗10-15分鐘（18）脫水、透明、封片、鏡檢。
SABC法
（1）脫蠟、水化（2）PBS洗2次各5分鐘（3）用蒸餾水或PBS配制新鮮的3%H2O2，室溫封閉5-10分鐘，用蒸餾水洗3次（4）抗原修復(fù)
（5）PBS洗5分鐘（6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多余液體（7）滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時(shí)或4℃過(guò)夜或37℃1小時(shí)
（8）PBS洗3次各2分鐘（9）滴加*化Ⅱ抗，20℃-37℃20分鐘
（10）PBS洗3次各2分鐘（11）滴加試劑SABC20℃-30℃20分鐘
（12）PBS洗4次各5分鐘（13）DAB顯色：試劑盒或自配顯色劑顯色
（14）脫水、透明、封片、鏡檢。
1126RAnti-5-HT抗體，5-羥色胺抗體
1124RAnti-5-HTR1A,5-羥色胺受體1A抗體
1125RAnti-5-HTR1B,5-羥色胺受體1B抗體
1892RAnti-5-HTR2B抗體
1056RAnti-5-HTR2A5-羥色胺受體2A抗體
1893RAnti-5-HTT/SERT,5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體
2126RAnti-5-HTR35-羥色胺受體3抗體
2127RAnti-5-HTR45-羥色胺受體4抗體
0526RAnti-5-LOX,5-脂氧合酶抗體
1278RAnti-8-OHdG,8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷抗體
1456RAnti-A2AR/AdenosineA2A-R,腺苷A2A受體抗體
0094RAnti-AACT-α1,α-1抗胰*抗體
1507RAnti-AAK1,AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體
1512RAnti-AARS2,丙氨酰tRNA合成酶2抗體
1603RAnti-AARS2丙氨酰tRNA合成酶2抗體
0096RAnti-AAT,α-1抗*抗體
1510RAnti-AATK,細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)*激酶抗體
1229RAnti-AATF,拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體
1627RAnti-ABCA1,腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體
1604RAnti-ABCB5,ATP結(jié)合蛋白家族5抗體
1224RAnti-ABCB6ATP結(jié)合蛋白家族6抗體
1960RAnti-ABCF1ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體
1231RAnti-ABCG1,三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體
0662RAnti-ABCG2/BCRP/BXP-21，三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體
1727RAnti-ABCG4,抗ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體
0583RAnti-ABL抗體,ABL1抗體
1230RAnti-ABL2/ARGABL2抗體
1961RAnti-ABI1/SSH3BP1,ABI1/SSH3BP1蛋白抗體
2410RAnti-ABP,雄激素結(jié)合蛋白抗體
0439RAnti-ACE1,血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抗體
1004RAnti-ACE2血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體
0203RAnti-ACEI，血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體
1962RAnti-ACD/PTOP，腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體
2511RAnti-AchE抗體,乙酰*酶抗體
0120RAnti-Acinus抗體,腺泡Acinus抗體
1227RAnti-Ack1抗體,Ack1抗體
0443RAnti-ACTH抗體,促腎上腺皮質(zhì)激素（1-39）抗體
0442RAnti-ACTH抗體,促腎上腺皮質(zhì)激素（18-39）抗體
0004RAnti-ACTH抗體,促腎上腺皮質(zhì)激素（7-23）抗體
0189RAnti-Actinα/α-SMA抗體,肌動(dòng)蛋白α抗體
1741RAnti-α-ACTN4,抗體α-輔肌動(dòng)蛋白4抗體
1571RAnti-F-Actin抗體,F-肌動(dòng)蛋白抗體
0046RAnti-AD7C-NTP/NTP/AF抗體,神經(jīng)絲蛋白抗體
2105RAnti-AD7C-NTP/NTP/AF抗體,神經(jīng)絲蛋白抗體（人）
0720MAnti-AD7C-NTP/NTP/AF抗體,神經(jīng)絲蛋白抗體
1208RAnti-ADAM-TS1/METH1,整合素樣金屬蛋白酶與*1型（抗體）
0433RAnti-ADAM-TS7抗體抗體,整合素樣金屬蛋白酶與*1型-7（抗體）
0733RAnti-ADAM-TS7抗體,整合素樣金屬蛋白酶與*1型-7抗體（N端抗體）
2167RAnti-DRADA/ADAR1抗體,Nterminal雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端）
2168RAnti-DRADA/ADAR1抗體,雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（C端）
1114RAnti-Adducinprotein抗體,內(nèi)收蛋白抗體
1164RAnti-ADFP/ADRP/adipophilin抗體,脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體
1673RAnti-AEV抗體,禽腦脊髓炎病毒抗體
1385RAnti-ADAM-TS12抗體,整合素樣金屬蛋白酶與*1型-12抗體
1930RAnti-ADH/AVP抗體,抗利尿激素/血管升壓素抗體
0610RAnti-AdipoR1抗體,脂聯(lián)素受體-1抗體
0611RAnti-AdipoR2抗體,脂聯(lián)素受體-2抗體
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