人結核菌素（PPD）Elisa試劑盒操作步驟
1.
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
40ng/L
5 號標準品
150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
20ng/L
4 號標準品
150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
10ng/L
3 號標準品
150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
5ng/L
2 號標準品
150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2.5ng/L
1 號標準品
150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2.
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.
配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.
溫育：操作同 3。
8.
洗滌：操作同 5。
9.
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
人結核菌素（PPD）Elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人結核菌素（PPD）水平。用純化的人結核菌素
（PPD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入結核菌素（PPD），
再與 HRP 標記的結核菌素（PPD）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗
滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的結核菌素（PPD）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測
定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人結核菌素（PPD）濃度
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