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所 在 地上海
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更新時(shí)間:2016-11-11 09:57:01瀏覽次數(shù):385次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 智慧城市網(wǎng)“MEK1/MAPKK1(Ser298)抗體/磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體"現(xiàn)貨應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA等實(shí)驗(yàn)中,*,無(wú)效免費(fèi)退換貨,咨詢 !博研生物科技有限公司以為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)而自豪。我們擁有經(jīng)驗(yàn)豐富的化學(xué)師嚴(yán)格控制化學(xué)品的質(zhì)量。
博研生物抗體應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA等實(shí)驗(yàn)中,*,提供完善的售前、售中、售后服務(wù)!咨詢或在線客服!我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)!在博研,我們堅(jiān)持對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量作不斷的評(píng)估、創(chuàng)新和改善以確保您對(duì)我們產(chǎn)品的高度信任。
【中文名稱】:MEK1/MAPKK1(Ser298)抗體/磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體現(xiàn)貨
【產(chǎn)品貨號(hào)】:BYK-1736R
【產(chǎn)品規(guī)格】:0.1ml/0.2ml
【產(chǎn)品價(jià)格】:詢價(jià)(電詢 客服:)
【抗體來(lái)源】:Rabbit OR Mouse
【產(chǎn)品用途】:科研實(shí)驗(yàn),用于免疫組化實(shí)驗(yàn),WB實(shí)驗(yàn),相應(yīng)的標(biāo)記抗體有HRP標(biāo)記抗體,F(xiàn)ITC標(biāo)記,BIO等。
【貨 期】: 現(xiàn)貨
【性 狀】: Lyophilized or Liquid
【濃 度】: 1mg/1ml
【亞 型】: IgG
【貯 存】: 貯存于-20℃.
【相關(guān)標(biāo)記】:HRP Biotin Gold RBITC AP FITC Cy3 Cy5 Cy5.5 Cy7 PE PE-Cy3 PE-CY5 PE-CY5.5 PE-CY7 APC Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 647
【產(chǎn)品介紹】:The protein encoded by this gene is a member of the dual specificity protein kinase family, which acts as a mitogen-activated protein (MAP) kinase kinase. MAP kinases, also known as extracellular signal-regulated kinases (ERKs), act as an integration point for multiple biochemical signals. This protein kinase lies upstream of MAP kinases and stimulates the enzymatic activity of MAP kinases upon wide variety of extra- and intracellular signals. As an essential component of MAP kinase signal transduction pathway, this kinase is involved in many cellular processes such as proliferation, differentiation, transcription regulation and development.
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Anti-ACEI, 血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體
Western-blotting試驗(yàn)方法:
蛋白提樣品制備
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中,于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清,加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌,然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,裂解過(guò)程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min,取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測(cè)蛋白濃度
SDS-PAGE電泳
1、 玻璃板對(duì)齊后放入夾中卡緊,然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。
2、按前面方法配10%分離膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時(shí),可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出,待膠面升到綠帶中間線高度時(shí)即可。然后膠上加一層水,液封后的膠凝的更快。(灌膠時(shí)開始可快一些,膠面快到所需高度時(shí)要放慢速度。操作時(shí)膠一定要沿玻璃板流下,這樣膠中才不會(huì)有氣泡。加水液封時(shí)要慢,否則膠會(huì)被沖變型。)
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線時(shí),說(shuō)明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4%的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時(shí)也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時(shí)要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后,兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠,將其放入電泳槽中。
6、 測(cè)完蛋白含量后,計(jì)算含20-50 μg蛋白(根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇,沒(méi)有固定的量)的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開始準(zhǔn)備上樣。(電泳液至少要漫過(guò)內(nèi)測(cè)的小玻璃板。)用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品,將樣品吸出不要吸進(jìn)氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品(包括一孔做可視的蛋白marker)。(加樣太快可使樣品沖出加樣孔,若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個(gè)樣品時(shí),進(jìn)樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次,以免交叉污染)
8、電泳:濃縮膠時(shí)用80-100 V跑,到分離膠以后用150-200 V跑,總時(shí)間2 h左右,電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳,進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜
1、 轉(zhuǎn)一張膜需準(zhǔn)備6張7.0~8.3 cm的濾紙和1張7.3~8.6 cm的NC膜。切濾紙和膜時(shí)一定要戴手套,因?yàn)槭稚系牡鞍讜?huì)污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有轉(zhuǎn)移液的搪瓷盤里放入轉(zhuǎn)膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過(guò)的膜。 將夾子打開使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊,用玻棒趕走氣泡。在墊子上墊三層濾紙。
3、將玻璃板輕輕撬開后剝膠,除去小玻璃板后,將濃縮膠輕輕刮去。小心剝下分離膠蓋于濾紙上,用手調(diào)整使其與濾紙對(duì)齊,輕輕用玻棒搟去氣泡。將膜蓋于膠上,要蓋滿整個(gè)膠(膜蓋下后不可再移動(dòng))并除氣泡。在膜上蓋3張濾紙并除去氣泡。zui后蓋另一個(gè)海綿墊,合起夾子。整個(gè)操作在轉(zhuǎn)移液中進(jìn)行,要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸,接觸后會(huì)發(fā)生短路。
4、將夾子放入轉(zhuǎn)移槽槽中,使夾的黑面對(duì)槽的黑面,夾的白面對(duì)槽的紅面。電轉(zhuǎn)移時(shí)會(huì)產(chǎn)熱,在槽的一邊放一塊冰來(lái)降溫。一般用60 V轉(zhuǎn)移2 h或40 V轉(zhuǎn)移3 h。
免疫反應(yīng)
1、將膜用TBS從下向上浸濕后,移至含有封閉液的平皿中,室溫下脫色搖床上搖動(dòng)封閉1 h。
2、將一抗用TBST稀釋至適當(dāng)濃度(在1.5 ml離心管中);將膜涂滿一抗溶液后置于濕盒中,4℃孵育過(guò)夜,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min。
3、同上方法準(zhǔn)備二抗稀釋液并與膜接觸,室溫下孵育1~2 h后,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min,進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
化學(xué)發(fā)光,顯影,定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合;1 min后,將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸;1 min后,將膜移至另一保鮮膜上,去盡殘液,包好,放入X-光片夾中,曝光相應(yīng)時(shí)間。沖洗膠片
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