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【中文名稱】：ERa（Tyr537）抗體/磷酸化雌激素受體α抗體現貨
【產品貨號】：BYK-1643R
【產品規格】：0.1ml/0.2ml
【產品價格】：詢價（電詢 客服:）
【抗體來源】：Rabbit OR Mouse
【產品用途】：科研實驗，用于免疫組化實驗，WB實驗，相應的標記抗體有HRP標記抗體，FITC標記，BIO等。
【貨 期】： 現貨
【性 狀】： Lyophilized or Liquid
【濃 度】： 1mg/1ml
【亞 型】： IgG
【貯 存】： 貯存于-20℃.
【相關標記】：HRP Biotin Gold RBITC AP FITC Cy3 Cy5 Cy5.5 Cy7 PE PE-Cy3 PE-CY5 PE-CY5.5 PE-CY7 APC Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 647
【產品介紹】：Estrogen and progesterone receptor are members of a family of transcription factors that are regulated by the binding of their cognate ligands. The interaction of hormone-bound estrogen receptors with estrogen responsive elements（EREs） alters transcription of ERE-containing genes. The carboxy terminal region of the estrgen receptor contains the ligand binding domain, the amino terminus serves as the transactivation domain, and the DNA binding domain is centrally located. Two forms of estrogen receptor have been identified, ER Alpha and ER Beta. ER Alpha and ER Beta have been shown to be differentially activated by various ligands. The biological response to progesterone is mediated by two distinct forms of the human progesterone receptor （hPR-A and hPR-B）, which arise from alternative splicing. In most cells, hPR-B functions as a transcriptional activator of progesterone-responsive gene, whereas hPR-A function as a transcriptional inhibitor of all steroid hormone receptors.
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ERa（Tyr537）抗體/磷酸化雌激素受體α抗體現貨Western-blotting試驗方法：
蛋白提樣品制備
1、 將培養液吸入至15 ml離心管中，于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清，加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解過程中要經常彈一彈以使細胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測蛋白濃度
SDS－PAGE電泳
1、 玻璃板對齊后放入夾中卡緊，然后垂直卡在架子上準備灌膠。
2、按前面方法配10％分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時，可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出，待膠面升到綠帶中間線高度時即可。然后膠上加一層水，液封后的膠凝的更快。（灌膠時開始可快一些，膠面快到所需高度時要放慢速度。操作時膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會有氣泡。加水液封時要慢，否則膠會被沖變型。）
3、 當水和膠之間有一條折射線時，說明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4％的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產生。插梳子時要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后，兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠，將其放入電泳槽中。
6、 測完蛋白含量后，計算含20-50 μg蛋白（根據自己的實驗需要進行選擇，沒有固定的量）的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中，加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開始準備上樣。（電泳液至少要漫過內測的小玻璃板。）用微量進樣器貼壁吸取樣品，將樣品吸出不要吸進氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品（包括一孔做可視的蛋白marker）。（加樣太快可使樣品沖出加樣孔，若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個樣品時，進樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數次，以免交叉污染）
8、電泳：濃縮膠時用80-100 V跑，到分離膠以后用150-200 V跑，總時間2 h左右，電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳，進行轉膜。
轉膜
1、 轉一張膜需準備6張7.0～8.3 cm的濾紙和1張7.3～8.6 cm的NC膜。切濾紙和膜時一定要戴手套，因為手上的蛋白會污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有轉移液的搪瓷盤里放入轉膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過的膜。 將夾子打開使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊，用玻棒趕走氣泡。在墊子上墊三層濾紙。
3、將玻璃板輕輕撬開后剝膠，除去小玻璃板后，將濃縮膠輕輕刮去。小心剝下分離膠蓋于濾紙上，用手調整使其與濾紙對齊，輕輕用玻棒搟去氣泡。將膜蓋于膠上，要蓋滿整個膠（膜蓋下后不可再移動）并除氣泡。在膜上蓋3張濾紙并除去氣泡。zui后蓋另一個海綿墊，合起夾子。整個操作在轉移液中進行，要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸，接觸后會發生短路。
4、將夾子放入轉移槽槽中，使夾的黑面對槽的黑面，夾的白面對槽的紅面。電轉移時會產熱，在槽的一邊放一塊冰來降溫。一般用60 V轉移2 h或40 V轉移3 h。
免疫反應
1、將膜用TBS從下向上浸濕后，移至含有封閉液的平皿中，室溫下脫色搖床上搖動封閉1 h。
2、將一抗用TBST稀釋至適當濃度（在1.5 ml離心管中）；將膜涂滿一抗溶液后置于濕盒中，4℃孵育過夜，用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min。
3、同上方法準備二抗稀釋液并與膜接觸，室溫下孵育1～2 h后，用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min，進行化學發光反應。
化學發光，顯影，定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合；1 min后，將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸；1 min后，將膜移至另一保鮮膜上，去盡殘液，包好，放入X-光片夾中，曝光相應時間。沖洗膠片
