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產品名稱:Caco-2細胞,人結腸腺癌細胞*
基本特性:
細胞數量:100萬個細胞數
細胞傳代:到客戶手上是3代以內的
細胞是一個獨立有序的、能夠進行自我調控的結構與功能體系。每一個細胞都具有一整套完整的裝置以滿足自身代謝的需要。單細胞生物能夠獨立地進行全部的生命活動。在多細胞生物中,盡管每一個細胞的功能受到整體的協調與控制,但每一個細胞都是一個獨立的、自我控制的、高度有序的代謝系統,有相對獨立的生命活動,各種組織都是以細胞為基本單位來執行特定的功能,整個機體的新陳代謝活動都是以細胞為單位協調地進行的。
只要具備合適的生存條件,每一個分離的細胞都可以在體外生長繁殖,表現出生命的特征。
體外培養的細胞直接生活在培養基中,因此培養基應能滿足細胞對營養成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
凍存液是20%FBS+10%DMSO+70%培養基。
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下面是有關細胞株,菌株培養的具體無菌技術:
1. 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后,再進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在臺面的*無菌區域,勿在邊緣的非無菌區域操作。
3. 小心取用無菌的實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開的容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應注意自身的安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染的細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級的無菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol 的產生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭的傷害等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
5.2. CO2 培養箱的CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。
5.3. 無菌操作臺內的airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000 小時/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水.
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