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非顯帶染色體的識(shí)別

2015年08月29日 09:09通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：6000

一、 實(shí)驗(yàn)原理
1．非顯帶染色體的識(shí)別
1968年以前，不通過(guò)帶紋，而從染色體整體分析。
1960年，丹佛會(huì)議上，提出了人類(lèi)有絲分裂染色體命名標(biāo)準(zhǔn)體制草案，為以后的所有命名報(bào)告奠定了基礎(chǔ)。
1963年，倫敦會(huì)議上，正式批準(zhǔn)Patan 提出的A、B、C、D、E、F、G七個(gè)字母表示七組染色體的分類(lèi)法。
1966年，芝加哥會(huì)議上，提出人類(lèi)染色體組和畸變速記符號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)命名體制。
A組（1-3號(hào)）
1號(hào)：zui大的中央著絲粒染色體，長(zhǎng)臂靠近著絲粒外有次縊痕。
2號(hào)：zui大的亞中著絲粒染色體。
3號(hào)：中央著絲粒染色體，比1號(hào)小三分之一。
B組（4-5號(hào)）：為較大的亞中央著絲粒染色體，二者不易區(qū)分。
C組（6-12號(hào)，X）：中等近中央著絲粒染色體，彼此難區(qū)分。
6、7、9、11號(hào)：著絲粒略近中央。
8、10、12號(hào)：偏離中央。
9號(hào)：q有次縊痕。
X位于6、7之間。
D組（13-15號(hào)）：中等近端著絲點(diǎn)染色體，p常有隨體。
E組（16-18號(hào)）
16號(hào)：中等中央著絲粒染色體，q上有次縊痕。
17號(hào)：較小，近中央著絲粒染色體。
18號(hào)：較小，近中央著絲粒染色體，p比17號(hào)更短。
F組（19-20號(hào)）：小的中央著絲粒染色體，彼此不易區(qū)分。
G組（21-22號(hào)，Y）：小的近端著絲粒染色體。
21、22號(hào)：p常有隨體，q常呈分枝狀彼此不易區(qū)分。
Y：p無(wú)隨體，q通常平行靠近。
2．顯帶染色體識(shí)別
1968年，T.Caspwesson 和他的同事們?cè)谌鸬浒l(fā)表了用鹽酸奎吖因或奎吖芥子染色的植物染色體的帶型圖。1970年，他們發(fā)表了zui早的人類(lèi)分帶核型。
1971年，巴黎會(huì)議上通過(guò)的文件不僅對(duì)每一條染色體而且對(duì)染色體區(qū)和帶都提出了基本鑒定體制，開(kāi)創(chuàng)了用帶的組成來(lái)描述結(jié)構(gòu)重排和變異的方法。
1977年，斯德哥爾摩會(huì)議上，
3．高分辨顯帶染色體識(shí)別
在細(xì)胞分裂時(shí)加入氨甲基喋呤使DNA合成暫時(shí)阻斷，細(xì)胞分裂在早期時(shí)進(jìn)入不同步化，終止培養(yǎng)前15分鐘加入秋水仙素，顯帶可達(dá)2000條。
二、實(shí)驗(yàn)方法
利用Geimsa染色液倒染10-15分鐘→在盛水塑料杯中沖涮→風(fēng)干
三、鏡檢
觀察細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為：
1．細(xì)胞完整，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上。
2．染色體形態(tài)和分布良好。
3．無(wú)重疊，即使有個(gè)別重疊，也要能明確辯認(rèn)，以免差錯(cuò)。
4．所觀察的細(xì)胞處于同一有絲分裂階段，即染色體螺旋化程度或染色體長(zhǎng)短大致一樣。
5．在所觀察的細(xì)胞周?chē)瑳](méi)有離散的單個(gè)或多個(gè)染色體存在，以免影響計(jì)數(shù)。
四、顯微攝影
一、 核型分析
1．核型：一個(gè)細(xì)胞內(nèi)所有染色體按一定順序排列起來(lái)，代表著某一個(gè)體所有細(xì)胞的染色體組成，包括數(shù)目、形態(tài)、大小等，分為A、B、C、D、E、F、G等七組和一組性染色體。
2．組型：把核型按模式圖的形式表現(xiàn)出來(lái)，代表一個(gè)種的染色體組成。
3．染色體分組及標(biāo)準(zhǔn)
4．方法和步驟：
1)顯微鏡分析：觀察標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞20-50個(gè)。
2)顯微照片分析：
①染色體計(jì)數(shù)
②染色體測(cè)量
相對(duì)長(zhǎng)度=單個(gè)染色體長(zhǎng)度/ 整套單倍染色體總長(zhǎng)×100
臂比率=q/p
1.0-1.7
1.7-3.0
3.0-7.0
7.0 以上
著絲點(diǎn)指數(shù)=p/(p+q) ×100
③配對(duì)：據(jù)大小、著絲點(diǎn)位置、隨體有無(wú)，zui后定細(xì)胞組染色體。
④染色體排列分組：p向上，q向下，著絲點(diǎn)排列在一條直線上。
⑤制作核型分析板——作出書(shū)面報(bào)告。

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